耐甲氧西林葡萄球菌的多重pcr快速检测

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1、耐甲氧西林葡萄球菌的多重PCR快速检测【关键词】葡萄球菌感染;甲氧西林抗药性;聚合酶链反应　　［摘要］目的采用多重聚合酶链反应（PCR）检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS），并对我院葡萄球菌的耐药率进行调查。方法对262株葡萄球菌（金黄色葡萄球菌86株，凝固酶阴性葡萄球菌176株）进行多重PCR扩增，并与琼脂稀释法作比较。对我院葡萄球菌的耐药率进行统计分析。结果以mecA基因阳性判断MRS，灵敏度为100%，特异度为96.6%，阴性预测值为100%，阳性预测值为99.0%;以mecA基因和femA基因阳性判断耐甲氧西林金黄色葡

2、萄球菌（MRSA），灵敏度为100%，特异度为99.5%，阴性预测值为100%，阳性预测值为98.5%。我院葡萄球菌耐药率为78.6%，其中凝固酶阴性葡萄球菌耐药率为79.0%，金黄色葡萄球菌耐药率为78.0%。结论多重PCR技术检测mecA基因能快速、敏感、准确地检测MRS，与femA基因联合检测能有效检测MRSA。MRS已成为日益严重的葡萄球菌感染问题。　　［关键词］葡萄球菌感染;甲氧西林抗药性;聚合酶链反应　　［ABSTRACT］ObjectiveTodetectmethicillin-resistantstaphy

3、lococcus（MRS）bymultiplePCR，andtoinvestigateitsdrugresistancerateinourhospital.MethodsTheDNAfragmentsof262strainsofstaphylococcus（staphylococcusaureus，86;co-agulase-negativestaphylococcus，176）plifiedbymultiplePCR.TheresultsecApositiveforMRSdetection，thesensitivity，

4、specificity，negativepredictivevaluesandpositivepredictivevalueecApositiveandfemApositiveformethicillin-resistantstaphylococcusaureus（MRSA）detection，thesensitivity，specificity，negativepredictivevaluesandpositivepredictivevalueecAgenebymultiplePCRforMRSissensitive，r

5、apidandaccurate.AbinationofmecAandfemAcaneffectivelydetectMRSA.MRShasbeeanincreasinglyseriousprobleminstaphylococcusinfection.　　［KEYRSA），MRSA和耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌（MRS）在世界上迅速蔓延，对β-内酰胺类抗生素的耐药性不断增强的葡萄球菌造成的感染已成为日益严重的临床问题。现已明确，大量产生的一种新的青霉素结合蛋白―――PBP2a是葡萄球菌对甲氧西林耐药的主要原因。mecA基

6、因是PBP2a的编码基因，只存在于葡萄球菌中，因此，mecA基因可作为耐甲氧西林葡萄球菌的分子标志［1］。本文依据多重聚合酶链反应（PCR）的基本原理，并结合本实验室的具体特点在葡萄球菌的16SrRNA基因内设计葡萄球菌的通用引物、耐甲氧西林葡萄球菌的mecA基因特异引物以及金黄色葡萄球菌（SA）的femA基因特异引物。采用多重PCR技术对标本进行快速检测，取得了较好的结果，现报告如下。　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1标本及其金黄色葡萄球菌标准株（ATCC25923）、大肠埃希菌标准株（ATCC25922）为本

7、室保存;mecA基因阳性标准MRSA菌株（SA0129）、耐甲氧西林表皮葡萄球菌（MRSE）标准菌株（SA0131）由美国Pfizer公司研究所提供。临床标本由青岛大学医学院第二附属医院检验科提供，其中甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）33株，MRSA53株，甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌（MSS）135株，MRS41株。标本于创面分离物、引流液、痰、血、中段尿等送检标本。　　1.1.2实验试剂与仪器基因组DNA提取试剂盒购自美国Promega公司;PCR试剂（TaqDNA聚合酶、4×dNTPs、10×buffer等）

8、购自加拿大MBI公司;DNAMarkerDL2000购自大连Takara公司;利用DNAStar软件设计的引物由上海生工公司合成。API-Staph鉴定系统、鉴定用生化和药敏试剂及细菌培养瓶均为法国梅力埃公司产品。血液琼脂平板、革兰染色液等均为本室自行配制。4800型DNA扩增仪为美国PERKIN公司产