201711刘为国老师口腔生物实验耗材

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1、斑的采集、染色和观察、分实验一类(4学时)实验目的与要求掌握牙菌斑标本的采集、处理和常用染一刚果红(Congored)负性染色的主要程序和方法,熟悉龈上或龈下菌斑中常见细菌的形态及分类方法。实验内容:斑标本的采集;细菌涂片的制备、染色;染色细菌的观察及Listgarten分类。实验设备和器材等用品:♦香柏油,二甲苯,菌斑染色剂,酒精,浓盐酸和灭菌的液状石蜡等。♦无菌牙科镊子、挖匙或探针(龈上菌斑检查用),载玻片,灭菌取菌环可卸式取器或消毒滤纸(龈下菌斑采集用),含预还原转送培养基的带盖小瓶,普通

2、光学显微镜,试镜纸,细菌接种环及装有体培养基的培养皿等刚果红负性染色方法:加入载玻片一端滴一滴2%刚果红染液一-待见样本混合后推片一一置浓盐酸上熏至Listgarten的分类标准:细胞直径0.5um〜1.0um♦球括少量球杆♦直杆菌:菌细胞宽0.5Pm〜1.5Pm,长1.0um〜1.9um,包括部分分支杆♦丝状菌:菌细胞宽0.5Pm〜1.5Pm,长与宽之比大于6:1,菌细胞多为不规则的长丝状杆♦梭状菌:菌细胞直径0.3U〜1.0Um,长约10um,其末端呈梭状;♦弯曲杆菌:菌细胞呈新月形或弯曲状

3、;♦螺旋体:菌细胞宽0.2Pm〜0.5Pm,长约10um〜20um,螺旋形,包括大、中、小三种螺旋体。实验结果与分析:龈上菌斑涂片刚果红负性染色结果注意事项:1.染色操作中,用浓盐酸熏蒸涂片时要小心2.该法不能检测细菌的活动性,但染色涂片可长期保存思考题:刚果红负性染色有何优点?菌斑采集时应该注意什么?耗材计划:1.无菌牙科镊子65个2.载玻片65个3.精密pH试纸(pH范围:0.5—5.0、1.43.0、2.7—4.7>3.8—5.4>5.4—7.0、5.5—9.0、6.4—8.0>6.9—8

4、.4>7.6—8.5>8.2—10.0、9.5—13.0)十一种规格,可以的话各买2本。4.普通漏斗2个(过滤用)5.滤纸(圆的,过滤用)2盒备用实验:龋齿活跃性的细菌学实验(4学时)实验用品:1.小试管70个、无菌压舌板65个、石蜡100ml、培养管70个、恒温培养箱2个2.Snyder培养基、MSB培养基、平皿70个注:Snyder(斯纳德)培养基的组成:胰蛋白水解物13.5g,酵母提取物6.5g,葡萄糖20.0g,NaC15.0g,溴甲酚绿0.029g,琼脂16.0g,蒸馏水1000ml,

5、冰醋酸调pH至5.0,高温高压消毒。MSB培养基的组成:胰蛋白水解物l.Og,月示胨0.5g,蔗糖20.0g,葡萄糖O.lg,磷酸二氢钾(无水)0.4g,琼脂2.0g,蒸馏水加至100ml,混合上述成分加热熔解使pH为7.6,加0.1%曲利苯蓝7.5ml,0.1%结晶紫0.8ml,充分混匀后,高压灭菌15min,冷却至50°C左右加1%亚碲酸钾溶液0.28ml,杆cm肽(200U/ml)0.1ml,再倾注平皿培养基需要现配:因此,两种培养基所用药品,都需要购买。pH范围规格包装(片/本)单价(元

6、/本)厂商/产地0.5—5.01.4—3.02.7—4.73-8—5-45.4—7.05.5—9.06.4—8-01001.80上海1001.80上海1001.80上海1001.80上海1001.80上海7.6—8.51001.80上海1001.80上海1001.80上海1001.80上海8.9—10.01001.80上海9.5—13.01001.80上海龋蚀活动性试验:原理:龋蚀病原菌在龋蚀活动性试验液中分解砂糖,产酸,根据试验液中指示剂变化情况判断酸性强弱。使用方法:用龋蚀活动性试验棉棒在上

7、颌后牙颊侧面摩擦数次,采取牙垢,然后,将棉棒投入含有试验液的培养瓶中,37°C培养48小时,对照比色本判定结果。结果判断:安全域:比色结果为0.0、0.5、1.0注意域:比色结果为1.5危险域:比色结果为2.0、2.5、3.0临床上,口腔医师借助口镜、探针、X线片比较容易检查出一个人是否患有龋病,但不能预测是否是龋活跃者或是否可能发生鍋病,因此,寻找一种可靠的龋病预测方法,判断龋病活跃程度,预测人群中龋病发生发展趋势是口腔预防医学的研宄课题。龋病活跃性是指一定时间内牙齿新龋的发生和现有龋损进行性

8、发展速度的总和,也可称为患龋的易感性和倾向性。驕病预测和活跃性试验的目的是:1.用于易感人群的筛选,找出龋病重点防治的对象。这有助于选择适当的预防措施和方法,有助于检测龋病发生、发展的趋势。2.作为评价预防措施是否成功的指标。3.用于初步筛选抗龋药物和评价抗龋药物效果的指标。4.有助于针对患者进行口腔卫生宣传教育和正确的口腔保健指导,使患者能主动实践口腔卫生措施,自身控制牙菌斑形成。5.作为龋病防治方案的重要依据和参考。一种理想的龋病活跃性试验就该具备以下条件:①检测结果与被查对象的患龋现状有相

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