慢乙肝病人vdr

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1、慢乙肝病人VDR前言乙型肝炎病毒感染呈世界性流行分布,全球约有20亿人曾感染过HBV（HepatitisBvirus，乙型肝炎病毒），在这个庞大群体中，3.5亿人为慢性乙型肝炎患者。据世界卫生组织报道，每年约有100万人死于HBV感染所导致的肝硬化、肝衰竭以及HCC（HepatocellularCarcinoma，肝细胞癌），慢性乙型肝炎现已严重威胁着人类的健康［16］。CHB(ChronicHepatitisB，慢性乙型肝炎)的发病机制十分复杂，其临床难以治愈，关键在于CHB的发病机制尚不明确

2、。近年来研究证实，CHB患者的免疫功能紊乱是其发病尤为重要的原因，这个复杂过程是由多种的免疫细胞和相关免疫细胞因子共同参与，但确切过程尚未完全清楚。目前认为，CHB是以肝细胞损伤和肝组织炎性反应为主的疾病，其肝脏损伤及转归与机体的细胞免疫功能及机体免疫耐受均密切相关，其主要以T淋巴细胞清除病毒和肝细胞的损伤为主［1］。1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3]是维生素D3的活性形式［2］,随着研究的深入，人们认识到1,25-二羟维生素D3除了能够调节钙磷代谢外，还具有介导免疫反应的作用

3、［3］，是一种重要的免疫调节剂。它可调节自然免疫细胞及适应性免疫细胞的增殖、分化及相关功能,这些细胞主要包括APCs(antigenpresentingcells，抗原递呈细胞)、NK(naturalkillercell，自然杀伤细胞)、单核巨噬细胞、Th(helperT，辅助性T淋巴细胞)、CD4+T淋巴细胞以及B淋巴细胞等。而这些免疫调节功能的实现主要是通过VDR(vitaminDreceptor，维生素D受体)来介导的。就VDR的组织分布和定位而言，VDR广泛分布于体内各组织细胞中。除了传

4、统的维生素D靶器官如肠道、肾脏、骨骼外，VDR还可存在于血液淋巴系统、泌尿生殖系统(如乳腺、前列腺、子宫、卵巢等)以及神经系统及甲状旁腺等。此外,在某些肿瘤组织中也发现有VDR的存在，如乳腺瘤、白血病细胞等。目前报导的VDR基因多态性主要与4个单核苷酸多态性位点有关，其多态性位点以相应的FokⅠ、BsmⅠ、ApaⅠ、TaqⅠ限制酶命名，分别为2号外显子的FokⅠ位点（等位基因F、f）、第8内含子的BsmⅠ位点（等位基因B、b）、ApaⅠ位点（等位基因A、a）及第9外显子的TaqⅠ位点（等位基因T

5、、t），大写字母代表无酶切位点，小写字母代表有酶切位点。其中，FokⅠ位点为C/T突变，导致编码氨基酸密码子427ACG→ATG突变；ApaⅠ位点为T/G突变；TaqⅠ位点为T/C突变，导致编码氨基酸密码子352ATT→ATC突变。实验一通过采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）的方法，初步探讨VDR-FokⅠ基因多态性是否与CHB患者的不同临床表型存在一定关系，为预测CHB患者的临床转归，同时也为改善CHB的治疗方法提供有新的、有价值的理论依据。..

6、实验一VDR-FokⅠ基因多态性与慢性乙型肝炎患者临床表型的关系材料与方法1.实验材料选择2013年5月～2013年11月山西医科大学第一临床医院感染科门诊及住院就诊的CHB患者130例，诊断标准参照病毒性肝炎防治方案（2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会修订），并以此标准分组：现症患者90例，其中重度患者组44例，男26例，女性18例，平均年龄（37.4+12.5）岁；中度患者组46例，男29例，女性17例，平均年龄（35.4+10.5）岁。对照组选择同期本院感染科门诊和住院

7、的慢性HBsAg携带者40例，其中男性27例，女性13例，平均年龄（32.5+9.2）岁，全部患者均为生活在本地区的汉族人群，无血缘关系。详细记录所有研究对象的肝功能相关指标（全自动生化分析仪检测,包括ALT、AST、AST／ALT、血清总胆红素TBIL、凝血酶原活动度PTA、血清白蛋白等）；血清学标志物（雅培I2000免疫分析仪定量检测，包括HBsAg、anti-HBs、HBeAg、anti-HBe和anti-HBc）及HBV-DNA滴度（实时荧光定量PCR仪检测）。所有患者在三个月内未使用免

8、疫调节剂和抗病毒药物，并排除合并其他病毒性肝炎，自身免疫性肝炎，肝硬化及肝癌等。全部患者均自愿参加本次研究。留取CHB中度及重度患者和慢性HBsAg携带者空腹12小时后晨起静脉血2mL（EDTA抗凝），分装并标记，保存于-80℃冰箱备用。.1.2主要试剂外周血DNA提取试剂盒，E.Z.N.A.SEBloodDNAKit，美国OMEGA公司；琼脂糖，AgaroseRegular，宝生物工程（大连）有限公司；重组DNA聚合酶，TakaRaTaq，大连宝生物公司；限制性内切酶，FokI，（TAKARA