核移植技术与动物克隆ppt课件

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1、第八章核移植与动物克隆克隆核移植正确看待克隆关于克隆人克隆：用无性方式产生后代群体。是指遗传上完全相同的分子、细胞或来自同一祖先的生物个体的无性繁殖群体技术水平：分子克隆(molecularclone)：即DNA克隆细胞克隆个体克隆（动物或植物）DNA克隆应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质与载体DNA接合成一具有自我复制能力的DNA分子，继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增,提取获得大量同一DNA分子，也称基因克隆或重组DNA(recombinantDNA)。重组、建造的DNA分子只有纯化繁殖才有意义。纯化繁殖DNA就称

2、为DNA克隆或分子克隆.基因的纯化繁殖就称为基因克隆。核移植技术概念:利用显微操作仪将外源细胞的核移入去核卵母细胞中，经人工活化和体外培养后，再移植入代孕母体内，使其发育为含有与供体细胞相同遗传物质的个体。现在一般将细胞核移植技术得到的动物称之为克隆动物，是目前动物克隆的主要方法。核移植的发展历史1952年，美国人罗伯特•布里格斯和T.J.金对豹蛙发育到囊胚期的胚胎细胞做移核试验，成功地获得了一个可以摄食的豹蛙幼体。1958年-1962年，英国剑桥大学利用爪蟾原肠内胚层细胞核移植，培育出可育的非洲爪蟾。1962年，童第周进行鱼类不同亚科间的核移植获得成功。20世

3、纪80年代，哺乳动物克隆技术迅速发展。1981年,Illmensee和Hopper首次报道将鼠ICM细胞核移植到去核卵母细胞,经过体外培养，有34%的重组胚胎发育为桑椹胚。这种胚胎移入受体后，19%发育产仔。这是在哺乳类第一次用胚胎细胞进行核移植获得成功。1986年,Willadsen首次报道在绵羊，采用去核的成熟卵母细胞做核受体与8-细胞的单个分裂球重构产生胚胎，首次应用电融合的方法克隆出一只小羊。1997年2月17日，英国科学家Wilmut等报道，利用体细胞核移植技术成功获得了克隆绵羊“多利”(Dolly)。2000年6月，西北农林科技大学成功获得成年体细胞

4、克隆山羊，标志着我国动物体细胞克隆技术的崛起。2001－2004年，山东莱阳农学院、中科院动物所、中国农业大学等相继获得几十头体细胞克隆牛出生。2003年9月中科院动物所与法国科学家合作，发明了能够精确控制大鼠卵细胞自发活化的专利技术，在国际上率先成功克隆出大鼠。这些成果表明我国在动物体细胞克隆的各项技术指标已达到国际先进水平，在一些技术方面居国际领先水平。在异种克隆方面，我国也有一些领先于国际水平的方面，例如中科院动物所和西北农林科技大学都获得大熊猫异质克隆囊胚。将大熊猫的体细胞核植入去核后的兔卵细胞中，成功地培育出了大熊猫的早期胚胎。供体细胞核的来源体细胞核

5、移植胚胎细胞核移植胚胎干细胞核移植供受体种间关系异种核移植同种核移植核移植目的生殖性克隆治疗性克隆核移植技术的分类胚胎细胞核移植将一个多细胞胚胎的细胞核,通过显微手术和细胞融合的方法,移植到一个去核卵母细胞中,构成新胚胎(克隆胚胎),然后移植给受体,获得与核供体胚胎基因型相同的后代(克隆动物)的生物技术。具有全能性，以其作为核供体进行核移植较容易成功。是克隆哺乳动物供核细胞最佳来源。成功的获得了克隆鼠、克隆羊、克隆猴等。体细胞核移植是指成体动物细胞核经显微手术和细胞融合的方法，移植到去核的卵母细胞内，或将体细胞核直接注入到去核卵母细胞质中,重新组成胚胎并使之发育

6、乃至产生子代。诱导已分化的细胞进入G0期，恢复其全能性。“血清饥饿法”恢复体细胞核全能性。体细胞核移植的过程卵母细胞去核供体细胞核电刺激使两细胞融合重组细胞重组胚胎新个体核移植技术克隆羊培育过程黑面绵羊去核卵细胞白面绵羊乳腺细胞核细胞核移植重组细胞电脉冲刺激早期胚胎胚胎移植另一头绵羊的子宫妊娠、出生克隆羊多利绵羊“多莉”整个克隆过程如下：母绵羊A乳腺细胞（体细胞）母绵羊B未受精的卵细胞母绵羊C“多莉”新的卵细胞发育成胚胎去核卵细胞提取细胞核细胞融合胚胎移植核移植技术的一般操作程序核受体的处理和制备核供体的处理和制备核移植重组胚的培养胚胎移植核受体的准备核受体：

7、去核卵母细胞超排卵处理，获得体内成熟的卵母细胞卵母细胞来源收集卵巢，吸取卵丘－卵母细胞复合体，体外培养成熟卵母细胞去核是否完全除去卵母细胞中期染色体，会影响克隆胚胎的发育能力,如果去除不完全,可导致克隆胚胎染色体的非整倍性,造成卵裂异常、发育受阻和胚胎早期死亡等。常用去核方法有:①盲吸法:用微细玻璃管在第一极体下盲吸,将第一极体、部分胞质(含中期染色体)除去。②半卵法:在透明带上做一切口,用微细玻璃管吸去一半细胞质至另一空透明带内,即将卵母细胞分为两半,然后用Hoechst33342染色确定不含染色体的一半为胞质受体。③功能性去核法:使Hoechst3342与卵

8、母细胞DNA结合后,用紫