小柴胡汤对hl

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1、小柴胡汤对HL【摘要】目的观察小柴胡汤对HL-60白血病细胞的体外分化诱导作用，并初步探讨其作用机制。方法通过药物作用后观察细胞形态学的变化，细胞吞噬功能及硝基蓝四氮唑（NBT）还原能力的改变；流式测定细胞周期改变和免疫组化检测抑癌基因P53的表达变化初步揭示其作用机制。结果小柴胡汤能使HL-60细胞显著向成熟粒系细胞分化而且吞噬功能、NBT还原能力出现增强的趋势，以中、高剂量组最为显著(P0.05)；并使HL-60的细胞周期阻滞于G0/G1期,S期细胞数减少，抑癌基因P53表达明显升高(P0.05)。结论小柴胡汤可诱导HL-60细胞向粒系成熟分化；其作用机制可能与阻滞细胞于G

2、0/G1期，并且上调抑癌基因P53的表达有关。【关键词】小柴胡汤HL-60分化诱导Abstract：ObjectiveToobservetheeffectsofHL-60celldifferentiationinducedbyXiaocaihudecoctionandtodiscussitsmechanism.MethodsThecellsdifferentiationechangesofcytomorphology,thecellsetryandanti-oncogeneP53expressionbyimmunityhistochemistry,themechanismina

3、rily.ResultsparedaturegranulocytemorphologicallyandHL-60cellphagocytosisandNBTreductionabilityarkedlyinmiddle-doseandhigh-doseXiaochaihudecoctiongroups(P0.05).paredountinSphaseiddle-doseandhigh-doseXiaochaihudecoctiongroupsandP53expressionaturegranulocytebyXiaocaihudecoctionandthemechanismma

4、yberelatedl药液；用消毒三蒸水分别配制成浓度为0.01，0.05，0.2mg/ml的稀释液；过滤消毒，-20℃保存。全反式维甲酸(sigma公司产品，批号：20050510)：ATRA先配制成浓度为10-1mol/ml的储存液,使用前用无血清RPMI1640培养液配制至终浓度为10-6mol/ml的稀释液；RPMI1640培养基（GIBCO公司产品，批号：1402027）；硝基四唑氮蓝(sigma公司产品，批号：1202775)；佛波酯（sigma公司产品，批号：290452）；聚苯乙烯颗粒（sigma公司产品，批号：1705027）。1.3试剂鼠抗人P53单抗（晶美

5、生物工程有限公司，批号：0603138）；即用型SABC（过氧化物酶）免疫组化试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司，SA1022）；DAB显色剂（北京中山生物技术有限公司，ZLI-9032，Lot：20168834）。2方法2.1细胞培养与分组将HL－60细胞置37℃,5%CO2孵箱中体外培养，取对数生长期的细胞进行实验。实验分为低剂量（0.01mg/ml）小柴胡汤组、中剂量（0.05mg/ml）小柴胡汤组、高剂量（0.2mg/ml）小柴胡汤组、全反式维甲酸(ATRA)组、空白对照组5组。2.2细胞分化状况检测2.2.1细胞形态学观察以0.5×105个细胞/孔接种于24孔板中，分

6、组加药，空白对照组加同等体积的无血清RPMI1640培养基。细胞培养6d后，收集细胞悬液；PBS液洗涤，离心，去上清液；沉淀加甲醇固定10min左右，涂片，常规I1640培养基，按2μl/ml混合），每管加1ml，混匀后置37℃、5%CO2孵箱中保温4h；收集细胞，离心，用PBS洗3次；吸取少许细胞悬液到载玻片上，并滴加一小滴0.5%的伊红，快速用盖玻片盖上在油镜下观察200个细胞，细胞内有5个以上颗粒的为阳性细胞，计算各组阳性细胞百分率。2.2.3硝基蓝四氮唑（NBT）还原能力测定细胞接种浓度，药物处理细胞方法同上。细胞培养6d后，收集细胞悬液，PBS液洗涤、离心、去上清液；

7、沉淀加入0.1％NBT0.5ml和200μg/ml的TPA20μl，混匀；37℃3h，离心终止反应；沉淀加甲醇固定10min左右，涂片，常规sa染色；油镜下观察200个细胞，胞质内有蓝紫色颗粒者为NBT阳性细胞，计算各组阳性细胞百分率。2.2.4流式细胞仪分析细胞周期以1×105个细胞/孔接种于6孔板中，药物处理细胞方法同上。细胞培养6d后，收集细胞悬液，PBS液洗涤3次，离心，去上清液；沉淀加1ml70%冷乙醇固定并重悬(细胞数106个)，用流式细胞仪分析。2.2.5免疫组化检测P53的表