艾滋病实验室检测新技术 蒋岩 中国cdc性病艾滋病预防控制课件

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1、艾滋病实验室检测新技术蒋岩中国CDC性病艾滋病预防控制中心二十一世纪第二届全国性病暨皮肤病学术研讨会2004年5月中国南京目的方法监测感染检测抗体检测(EIA/PA/RT)检测策略窗口期检测抗原检测，核酸检测poolingRT-PCR诊断感染诊断WB检测策略近期感染诊断STARSH方法治疗评价CD4/CD8测定流氏仪检测显微镜法病毒载量测定NASBA,b-DNA，RT-PCR耐药性检测基因型，表型窗口期检测抗原检测核酸检测PoolingRT-PCR方法窗口期的范围定义依据时间长度抗体检测3-6个月新的EIA试剂可以缩短至14-21天抗原检测1-2周第四代抗

2、原抗体检测试剂可以使窗口期比第三代抗体试剂缩短4-5天核酸检测5-11天抗原检测P24试剂盒，第四代EIA试剂（1997年在欧洲正式批准用于血液筛查）每一个HIV粒子含有1200个p24抗原分子=0.048fg每一个HIV粒子含有2个RNA拷贝，如果病毒载量测定结果为400拷贝/ml，即等于有2.4X105个分子=0.0096pgp24抗原/ml，800拷贝/ml，即等于有4.8X105个分子==0.019pgp24抗原/ml目前最敏感的抗原检测试剂盒的检测阈值为0.01pg/ml抗原在血清抗体阳转前2-18天既可以检测到样本（血清/浆）中的p24抗原包括

3、游离的抗原和病毒粒子中的抗原EIA测定的抗原浓度(F)：病毒RNA拷贝数推算的抗原浓度(A)=0.16：2900样本号EIA(Cutoff)EIA(pg/ml)RNA拷贝/mlp24pg/mlF/A13.10.11,4000.033.124.70.1637000.091.83451.511000.0356432011800001.95.65682.3400000.962.46220.731900004.50.16样本经过预处理，破碎病毒粒子后将有利于p24抗原的检测病毒RNA检测第一次病毒学症高峰时间大约在感染后4-11天病毒RNA检测方法：NASBA,R

4、T-PCR,b-DNA在高度怀疑有原发感染时，且经抗体检测之后抗体检测阴性或不确定，有高危行为史或暴露史，特别是伴有相应的临床表现时，用核酸检测进行辅助诊断。早期诊断应用：个体检测、血液筛查、性病门诊病人筛查、PMTCTPoolingRT-PCR由于核酸检测的成本很高，方法费时，不可能作为血液筛查的方法，目前在欧洲用pooled血液的方法进行核酸检测，其敏感性取决于pooped样本大小及检测的预值（用特殊的RT-PCR试剂盒检测，以提高敏感性）。可能低于抗原检测，但在个体献血者核酸检测可能比抗原检测更具成本效益。1473份样本处理过程新近感染检测抗体检测—

5、—EIA,PA,RT——WB试验阴性——抗原检测/核酸检测阳性——STARSH——新近感染STARHS法1998年开始，美国JanssenRS等专家推出一种新的实验室方法用于新感染病例的监测，即敏感的酶联免疫检测法（3A11）和非敏感的酶联免疫检测法（3A11—LS）:原理：利用感染早期抗体滴度低的特征，以敏感ELISA试剂（3A11）和非敏感ELISA试剂（3A11-LS）对经过一定程度稀释的同一样品进行测定，3A11检测呈阳性而3A11—LS检测呈阴性反应者为新发感染，与以往感染的病例区分开来，可以确切地估测新感染人数。近几年，该方法已在一些国家得到了

6、应用，为这些国家制定艾滋病预防控制策略提供了准确和重要的技术支持。检测新发或新近HIV感染的目的l无须耗时并昂贵的前瞻性队列研究来识别早期感染。l由单一的患病样本来估计人群发病率。l以新发感染的个体为研究或干预对象。l识别早期感染以进行早期治疗和临床关怀l评估预防措施和目标l监测亚型和药物抵抗株的传播l找出适合疫苗实验的高危人群TARHS：新发HIV血清转换的血清检测运算法则暴露HIV+AIDS(1)敏感性试验++(2)STARHS试验_+在同一时间应用两种不同试验分析血样来检测新发感染（1）敏感性试验（EIA）血清转换早期即可出现阳性（2）非敏感性试验（

7、改调的EIA：STARHS）血清转换晚期才可出现阳性新发感染血清转换=EIA+&STARHS-STARHS试验的窗口期暴露EIA+DetunedEIA+AIDS窗口期=从EIA+到detuned的EIA+之间的时间在血清转换者有所不同，依赖于HIV的亚型和试验OrganoTekniaka,对亚型B，估计值为：90%3.3个月754.0505.1256.4108.2STARHS的应用条件非AIDS病人——AIDS病人有很低的抗体水平，象血清阳转非HAART治疗——HAART治疗病人有很低的抗体水平，象血清阳转抗体检测策略监测：初筛-复合-确认策略EIA-EI

8、A替代策略诊断：初筛-复合-确认策略EIA-EIA-PA/RT替代