姜状三七不同溶剂提取部位pt药效活性的谱效关系研究

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1、姜状三七不同溶剂提取部位PT药效活性的谱效关系研宄李珊珊唐艳梅赵紫伟许银风（通讯作者）（云南经济管理学院天然药物研究所云南昆明650106）【摘要】目的:阐明姜状三七药材不同提取部位的指纹图谱特征峰所代表的化学成分及对凝血酶原时间试验（PT）中抗凝血活性药效贡献的大小，表征姜状三七的药效物质基础。方法：采用HPLC法建立姜状三七药材不同提取部位指纹图谱，以不同提取部位对PT试验的时间指标的影响研宄其抗凝血作用，釆用灰色关联分析法建立谱效联系，分析明确了成分化学物质与抗凝血活性作用贡献程度的大小。结论：姜状三七不同提取部位对抗凝血作用的关键物质基础是Rl、Rbl、Rd和13号色谱峰物质成分。用

2、灰关联度分析色谱峰对药效功效的大小，最后能为科学评价姜状三七不同提取部位抗凝血作用提供理论基础。【关键词】姜状三七；抗凝血；谱效关系【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）32-0376-02姜状三七为五加科人参属植物姜状三七PanaxzingiberensisC.Y.WuetK.W.Feng的根及根茎。味苦，性温，有散瘀、止血、定痛等疗效，具有治疗内伤出血、产后血晕虚伤咳嗽贫血等作用。中药共性技术的群体成分“宏观分析”质量评价模式成为现阶段中药现代化研宄的主流方式之一，使指纹图谱中化学成分体现相应的药效，并能阐明指纹图谱特征与药效的相互关系，确定

3、药效物质基础。木研宄从姜状三七不同极性溶剂提取部位的HPLC指纹图谱与抗凝血药效关系入手，对不同极性溶剂提取部位的抗凝血活性进行评价，通过灰关联度分析，初步探明与姜状三七抗凝血作用关联度的化学成分群。1.仪器、试药及材料1.1仪器Ultimate3000超高效液相色谱仪（LPG-3400SD四元泵，WPS-3000自动进样器，VWD-3100紫外检测器，TCC-3000RS柱温箱），AB265-S十万分之一电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司），KS-600D超声提取器（宁波科生仪器厂），中药色谱指纹图谱计算机辅助相似性评价系统软件（中国药典委员会推荐），BUCHIR-200型旋转蒸发仪（瑞士B

4、uchi公司）。1.2试药三七总皂苷对照品（批号：110870-201002），购于中国药品生物制品鉴定所。乙腈（美国Fisher公司，色谱纯）,纯浄水（PT-RO-SHY10L,迈瑞生化科技），甲醇（美国Fisher公司，分析纯）。法华林钠购自美国西格玛公司；标准质控血浆lenell购自德国DadeBehringMarburg公司；凝血酶原吋间测定试剂盒购自北京世帝科学仪器公司1.3材料10批药材购自道地产区不同区域的栽培品，并按现行版药典三七有关项下进行各类鉴别与检测，均符合正品三七药材质量控制规定。在前期指纹图谱研究中，阐明云南金平、景东和砚山的姜状三七质量为优。则本研究中以此三地的药

5、材样品为代表，作为不同极性溶剂提取部位的研究对象。1.4预实验溶剂筛选通过预实验多溶剂及混合比例有机溶剂HPLC图谱峰数比对，确认以水、乙醇、乙酸乙酯为提取溶剂的姜状三七极性部位作为本实验研究对象，深入分析。1.方法与结果[1]2.1色谱条件LichrospherODS-C18柱（4.6×250mm,5um）;流动相：A:水，B:乙腈，洗脱梯度为：0〜20min乙腈20%、20〜45min20%〜46%、45〜55min46%〜55%、55〜60min55%;检测波长：203nm；柱温:30°C；进样量：10µL；流速：1.5mL/min。2.2供试品溶液的制备取姜状

6、三七药材log,加入10,8,6倍不同溶剂（水、乙醇、乙酸乙酯、石汕醚）分别提取60,45,30min,提取液离心合并，减压浓缩，所得残留加70%甲醇溶解后溶至10mL容量瓶中，既得不同溶剂取液部位供试品溶液（浓度为20mg/ml），过0.45µm微孔滤膜，备用。共制备12份样品（金平、景东和砚山个4份）。2.3对照品溶液的制备取三七总皂苷对照品50mg,精密称定，置10ml量瓶中，用70%甲醇溶解并稀释至刻度，即得。2.4精密度考察取8号姜状三七水提取供试液，按2.1项下色谱条件，连续进样6次,记录色谱图。结果指纹图谱相似度的精密度RSD0.23%。各主要色谱峰相对保留时间RS

7、D在0.00%〜0.30%。表明仪器精密度良好。2.5重复性考察取8号姜状三七样品共6份，按2.1.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件，进样，记录色谱图。结果指纹图谱相似度的RSD0.52%。各主要色谱峰的相对保留吋间RSD在0.00%〜1.64%。表明此分析方法重复性良好。2.6稳定性考察取同一供试品溶液，按2.1项下色谱条件，分别在0,4,6,8,12,24,48h进样，记录色谱图。结果指纹图