RDP修饰的姜黄素长循环脂质体靶向脑胶质瘤递药系统的研究

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1、RDP修饰的姜黄素长循环脂质体靶向脑胶质瘤递药系统的研究重庆大学博士学位论文学生姓名：肖亚若指导教师：侯长军教授专业：生物学学科门类：理学重庆大学生物工程学院二O一七年十月ResearchontheDrugDeliverySystemTargetedtoGliomasbyRDP-modifiedLong-circultingCurcumin-loadedLiposomesAThesisSubmittedtoChongqingUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementfort

2、heDoctor’sDegreeofEngineeringByYaruoXiaoSupervisedbyProf.ChangjunHouSpecialty:BiologyCollegeofBioengineeringofChongqingUniversity,Chongqing,ChinaOctober,2017中文摘要摘要恶性脑胶质瘤（malignantgliomas，MG）是成人中枢神经系统中最常见的癌症，也是原发性脑肿瘤中预后最差的肿瘤。MG手术难以完全切除，复发率较高，生存期短，预后差，对人类的健康构成了极大的威胁

3、。正因如此，迫切需要研制出一种更加有效且副作用较小的治疗剂。而具有多功能和多目标特征的天然化合物或其衍生物具有被开发成癌症最佳药物的潜力。近年来,姜黄素（curcumine）因其在高剂量下对人体无毒并具有广泛和确切的生物活性及药理作用而受到了广泛关注。研究表明，姜黄素具有抑制多种细胞系的致癌作用，其作为治疗胶质瘤的潜在抗癌剂具有较高的研究价值。但是，由于姜黄素的一些性质致使其生物利用度很低，药代动力学不足，其在治疗MG方面的应用也受到一定的限制。将化学治疗剂递送到实体瘤以及提高其生物利用度的有效方法一直是当前生物医学研究中

4、的主要挑战。在最近几十年里，基于纳米载体和纳米技术在医学成像和靶向药物递送领域里的迅速发展。脂质体（liposome）作为一类药物递送系统在抗肿瘤药物的传递中具有很大的优势。此外，通过表面修饰亲水性分子如聚乙二醇（PEG），脂质体的循环时间会进一步增加，并能通过实体瘤的高通透性和滞留（EPR）效应被动靶向肿瘤细胞。目前，虽然对靶向脂质体已经有了较为深入的研究，但针对脑靶向脂质体的研究很少。血脑屏障（BBB）使治疗药物无法进入中枢神经系统（CNS）。临床上，CNS药物递送失败主要是由于缺乏适当的靶向递药系统（TDDS）。狂犬

5、病病毒具有高度的嗜神经性，而衍生自狂犬病病毒糖蛋白（RVG）的多肽（Rabies-derivedpeptide,RDP）作为药物递送至大脑的靶向配体的出现，已经显示出其有作为非侵入性地克服BBB，从而用于靶向治疗的潜力。综合以上可以看出，开发安全有效并能靶向到达肿瘤部位的抗脑肿瘤制剂，采用主动靶向递药策略，对于治疗恶性脑胶质瘤具有重要意义。课题研究目的在于，开发一种安全有效的靶向脑胶质瘤递药系统，采用RDP多肽主动脑靶向和长循环脂质体在肿瘤部位的EPR效应被动靶向治疗恶性胶质瘤。本文在第一章简要介绍了该研究的背景和意义，并

6、重点综述了RDP脑靶向序列研究的进展。随后，在主体实验部分，主要研究内容包括三个相互关联的部分：（1）RDP多肽修饰靶向姜黄素长循环脂质体(RDP-Lip/CUR)的制备与表征；（2）RDP-Lip/CUR体外靶向性及药效评价；（3）RDP-Lip/CUR体内靶向性及药效评价三个方面。具体研究内容及结果如下。I重庆大学博士学位论文首先，采用固相合成法合成RDP多肽并利用NHS-PEG2000-DSPE中活性基团NHS与RDP多肽N端游离氨基反应，合成靶向材料RDP-PEG2000-DSPE。通过HPLC监测连接反应进程，用

7、MALDI-TOF-MS对其进行表征，结果表明靶向材料连接成功。继而采用薄膜分散法，通过设计优化工艺分别制备了非靶向姜黄素长循环脂质体（mPEG-Lip/CUR）和RDP修饰的靶向姜黄素长循环脂质体（RDP-Lip/CUR），其平均粒径分别为98.3nm和102.7，分散系数为0.205和0.239，Zeta电位分别为-32.5mV和-30.8mV，包封率为89.56%和88.72%。透射电镜和原子力显微镜观察RDP-Lip/CUR外观圆整，分散均匀。体外释放结果表明所制备的脂质体上是否修饰RDP多肽对CUR的释放没有影响

8、。在4度放置1个月后，能维持较好的稳定性。在成功合成了靶向药物之后，需要考察其细胞靶向性和体外抑瘤作用。我们选用神经细胞人脑胶质瘤U87细胞和非神经细胞人肺腺癌上皮细胞A549细胞，通过荧光显微镜观察U87和A549细胞对RDP-Lip/CUR及mPEG-Lip/CUR的摄取情况，结果表明在U87细胞中