肾病有效标志物—胱抑素c检测方法的建立

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1、分类号：密级：公开UDC：编号：肾病有效标志物—胱抑素C检测方法的建立THEESTABISHMENTOFTHEDETECTIONOFKIDNEYDISEASEEFFCTIVEMARKER-CYSTATINC学位授予单位及代码：长春理工大学(10186)学科专业名称及代码：化学（0703）研究方向：生物与化学分析申请学位级别：硕士指导教师：张淑华研究生：及雪敏论文起止时间：2015.09—2016.12长春理工大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的硕士学位论文，《肾病有效标志物-胱抑素C检测方法的建立》是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经

2、注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：年月日长春理工大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者及指导教师完全了解“长春理工大学硕士、博士学位论文版权使用规定”，同意长春理工大学保留并向中国科学信息研究所、中国优秀博硕士学位论文全文数据库和CNKI系列数据库及其它国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权长春理工大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，也可采用影印、缩印或扫

3、描等复制手段保存和汇编学位论文。作者签名：年月日导师签名：年月日摘要肾脏疾病严重危害人类的健康，给人们带来了生活和经济上负担。肾小球滤过率(Glomerularfiltrationrate,GFR)是评价肾功能的一个常用指标。胱抑素C(CystatinC,Cys-C)是衡量GFR的有效标志物。Cys-C常用检测方法存在弊端。因此，建立一种简单、方便、特异地检测Cys-C的方法具有非常重要的意义。本实验通过噬菌体表面展示技术获得Cys-C的亲和配体。经过三轮淘洗获得目标序列：Q-V-N-G-L-G-E-R-S-Q-Q-M。用人工固相合成方法标记FITC以制得荧光探针FITC-A

4、cp-Q-V-N-G-L-G-E-R-S-Q-Q-M，通过HPLC和MS进行测定，分子量与理论值相符。当Cys-C浓度在0.039μg/mL-2.5μg/mL时，检测的荧光强度与Cys-C浓度符合线性方程：y=182.12x+33.842,R²=0.9990；当Cys-C的浓度在2.5μg/mL-160μg/mL时，检测的荧光强度与Cys-C浓度符合曲线方程：y=599.3ln(x)-119.79，R²=0.9964。探针的荧光强度值与Cys-C浓度总体呈正相关。可为肾病早期检测提供一种有效的新方法。关键词：胱抑素C生物标志物噬菌体表面展示肽库荧光探针IABSTRACTCur

5、rently,thekidneydiseaseissoseriousthatitisharmfultothehealthofhumanbeings.Glomerularfiltrationrate(GFR)isanindexwhichiscommonlyusedtoestimaterenalfunction.CystatinC(Cys-C)isbeingconsideredasaspecialbiomarkerforGFR.TherearealotofmethodstomeasureCys-C.Butthesemethodshavebeenfoundmanydisadvant

6、ages.ThepurposeofthesiswastoestablishamethodtodetectCys-Cwiththelowcost,easyoperationandspeciality.ThespecificsequenceofaffinityligandofCystatinCwasobtainedbyselectionofthePh.D.-12PhageDisplayPeptideLibrary.Afterthreeroundsofpanning,wegainedaCys-Cspecificpeptidesequence:Q-V-N-G-L-G-E-R-S-Q-

7、Q-M.Thepeptidewassynthesizedbythemanualway,coupledwithFITCasafluorescentprobe:FITC-Acp-Q-V-N-G-L-G-E-R-S-Q-Q-M.Withhighpressureliquidchromatographyandmassspectrometrymeasuring,molecularweightoftheprobeiscoincidedwiththetheoreticalvalue.Whentheconcentrati