黄连解毒汤方药3种方法提取液成分比较

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1、黄连解毒汤方药3种方法提取液成分比较【关键词】黄连解毒汤；指标成分；超滤；提取方法　　Abstract：ObjectiveTooptimizetheextractiontechnologyofHuanglianJieduDecoction.MethodsTakingtheberberine,baicalin,geniposide,totalalkaloid,totalflavonoid,extractofmolecular1000Dastheindexes,themethodsofsemi-bionicsex

2、traction(SBE),alcoholextraction（AE），ethodinpreparationofHuanglianJieduDecoction.　　Keyethods　　黄连解毒汤始见于唐·《外台秘要》，由黄连、黄芩、黄柏和栀子组成，具有清热、泻火、解毒之功效。根据SBE法理论［1，2］，在SBE法工艺优选和醇提最佳浓度的基础上，为进一步探讨该方药用SBE法提取是否较目前普遍使用的提取方法为佳，故以小檗碱、黄芩素、栀子苷、总生物碱、总黄酮、1000D提取物为指标，对该方药3种提取方法进行平行对

3、照实验。　　1仪器与药品　　pHS-3C型精密pH计（上海雷磁仪器厂）；MA110型电子分析天平（上海第二分析仪器厂）；AgiLent1100高效液相色谱仪（G1315A二极管阵列检测器）；UV3010型紫外分析仪（日立公司）；KQ-250E型医用超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；中空纤维超滤膜（上海德宏生物医学科学科技发展有限公司）。　　中药经山东中医药大学张兆旺教授鉴定：黄连为毛茛科植物黄连CoptischinensisFranch的干燥根茎；黄芩为唇形科植物黄芩ScμtellariabaicaLe

4、nsisGeorgi的干燥根；关黄柏为芸香科植物黄檗PhellodendronamμrenseRupr的干燥树皮；栀子为茜草科植物栀子GardeniajasminoidesEllis的干燥成熟果实。　　盐酸小檗碱（111595－200604）、黄芩素（110715－200815）、栀子苷（110749－200613）均购自中国药品生物制品鉴定所；甲醇、乙腈均为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。　　2方法　　2.1样品液制备　　2.1.1半仿生提取液（SBE液）按处方比例称取10～20目黄连15g、黄芩1

5、0g、关黄柏10g、栀子15g，按黄连、栀子合煎，黄芩、关黄柏合煎的组合方式，分别浸泡30min，分别用SBE法提取3次，加水量依次为药量的10,8，8倍，3煎pH值依次为6.0，7.5，8.5，提取时间依次为120，60，30min，分别将3煎提取液依次粗滤，离心，一定规格的中空纤维超滤膜滤过，浓缩，合并，定容至250ml，即得方药1000D提取物的SBE样品液(质量浓度为2.0×102g·L-1)。　　2.1.2醇提液（AE液）按“2.1.1”项下方法，只改用优选的醇提最佳浓度61%的醇溶液作溶剂，依法即

6、得方药1000D提取物的AE样品液(质量浓度为2.0×102g·L-1)。　　2.1.3水提液（l，水浴浓缩蒸至近干，加硅藻土0.8g，蒸干，研匀，精密加入甲醇25ml溶解，称重，超声提取30min，放冷，补足失重，滤除残存硅藻土，即得SBE、AE、l，用甲醇定容至10ml，即得SBE，AE，l，拌入聚酰胺60～90目0.5g，加入已处理的聚酰胺柱上。依次以蒸馏水300ml,20%乙醇100ml,70%乙醇80ml洗脱至无色，收集洗脱液，浓缩，再用70%乙醇定容至50ml，得溶液甲。精密量取上述溶液甲各25.

7、0ml，水浴蒸干，残渣加甲醇定容至10ml，即得SBE、AE、l，用70%乙醇定容至10ml，得SBE、AE、g，分别依次用甲醇和pH7.0的缓冲溶液配制，得对照液Ⅰ（0.395mg·ml-1）和对照液Ⅱ（0.101mg·ml-1）。　　精密称取黄芩素对照品7.38，3.68mg，分别依次用甲醇和70%乙醇配制成对照液Ⅲ（0.295mg·ml-1）和对照液Ⅳ（0.147mg·ml-1）。　　精密称取栀子苷对照品7.33mg，用甲醇配制成对照液Ⅴ（0.293mg·ml-1）。　　2.4小檗碱含量测定　　2.4.

8、1色谱条件色谱柱为DiamonsilC18（5μm，250mm×4.6mm）；流动相为乙腈-0.05mol/LKH2PO4（30∶70）；检测波长265nm；流速1.0ml/min；进样量20μl；柱温30℃。［3］。见图1。　　2.4.2标准曲线的绘制精密吸取“2.3”项下对照液Ⅰ，按上述色谱条件，进样2，4，6，8，10μl。以峰面积为纵坐标，盐酸小檗碱的含量（μg）为横坐标，得回归方程为：Y=