实验一 普通光学显微镜的结构与使用方法

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1、实验一普通光学显微镜结构与使用方法杭州师范大学陈建明一、实验目的和要求了解显微镜的构造和各部分的作用，掌握显微镜的使用技术和保养措施学会简易临时玻片的制作方法和生物绘图方法二、实验内容在显微镜下练习观察动、植物玻片标本。制作洋葱鳞叶内表皮细胞临时装片，进行显微镜操作练习。在显微镜下观察池塘水样中的微小生物。三、相关知识与实验原理要知道的几个重要的分辨率人眼：0.2mm/250mm光学显微镜：0.2um电子显微镜：0.2nm显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显

2、微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。1.光学显微镜普通生物显微镜由3部分构成：①照明系统：包括光源和聚光器。②光学放大系统：由物镜和目镜组成，是显微镜的主体。③机械装置：用于固定材料和观察方便，包括镜台(载物台)、调节器和、物镜转换器(旋转器)等。尼康E-600显微镜显微镜概述普通光学显微镜的构造目镜粗准焦螺旋镜筒细准焦螺旋转换器物镜镜臂聚光器反光镜镜座2.荧光显微镜尼康E800荧光DIC显微镜荧光显微镜照片（微管呈绿色、微丝红色、核蓝色）3.激光共聚焦扫描显微镜LCSM照片蓝色为细胞核，绿色为微管4.暗视野显微

3、镜darkfieldmicroscope聚光镜中央有挡光片，视野背景是黑的，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，物体边缘是亮的。可观察4~200nm的微粒子，分辨率比普通显微镜高50倍。把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处。环形光阑（annulardiaphragm）：位于光源与聚光器之间。相位板（annularphaseplate）：物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。5.相差

4、显微镜Fourtypesoflightmicroscope●Bright-fieldmicroscope:theimageobtainedbythesimpletransmissionoflightthroughacellinculture●Dark-fieldmicroscope:thecellappearsasabrightobjectagainstadarkbackground●Phase-contrastmicroscope:visualizinglivingcells●Differential-interfer

5、ence-contrastmicroscope:visualizinglivingcells普通光学显微镜的基本结构普通光学显微镜的构造可分为两部分：一为机械装置，二为光学系统。机械装置由镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋和微动螺旋等组成。光学系统由目镜、物镜、聚光器、光源、滤光片、虹彩光圈等组成组成光学放大系统照明系统机械和支架系统物镜光源折光镜聚光镜滤光片目镜显微镜的结构普通光学显微镜基本构造光学显微镜基本结构：1.照明灯(Lamp)2.聚光器(Condenser)3.载物台和切片夹(Mechanica

6、lstageandspecimenretainer)4.推进器(Mechanicalstageadjustmentknob)5.物镜(Objectives)6.粗细螺旋(Courseandfinefocusknob)7.目镜(Oculars)8.照相机等接口(Connectiontocamera,etc.)1.物镜物镜(objective)是光学显微镜成像系统中决定其分辨率或叫分辨本领的最关键部件。物镜标识2.目镜目镜的作用是把物镜放大的实象再放大一级，并把物象映入观察者的眼中，实质上目镜就是一个放大镜。显微镜的分辨率能

7、力是由物镜的数值孔径所决定的，而目镜只是起放大作用。对于物镜不能分辨出的结构，目镜放的再大，也仍然不能分辨出。3.聚光镜聚光镜装在载物台的下方。小型的显微镜往往无聚光镜，在使用数值孔径0.40以上的物镜时，则必须具有聚光镜。聚光镜不仅可以弥补光量的不足和适当改变从光源射来的光的性质，而且将光线聚焦于被检物体上，以得到最好的照明效果。显微镜的光学原理成像原理光路：光源→虹彩光圈→聚光镜→通光孔→标本（一定要透明）→物镜→镜筒→目镜→眼。显微镜的放大倍数四、实验器材显微镜、擦镜纸、镊子、小剪、载玻片、盖玻片、解剖针、表面皿、

8、吸水纸、碘液、清水、香柏油、二甲苯。洋葱鳞茎，棉花老根横切玻片标本，池塘水样五、实验方法和步骤（一）显微镜的使用1.取镜和安放置显微镜于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约为3~4cm。镜检者姿势要端正。（取、放显微镜时应一手握住镜臂，一手托住底座，使显微镜保持直立、平稳。切忌用单手拎提；且不论使用单筒显微镜或双筒显微