执业兽医资格考试免疫学15免疫学技术课件

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1、第十五单元免疫学技术概论南京农业大学张炜电话：13814076553Email:vszw@njau.edu.cn第1节概述一、免疫学技术的概念及分类免疫学技术是利用抗原抗体特异性反应的原理建立的各种检测与分析技术，以及建立这些技术的各种制备方法。分为免疫血清学技术免疫制备技术细胞免疫技术二、免疫血清学反应的特点及影响因素一般特点特异性与交叉性抗原与抗体结合力最适比例性反应的阶段性影响因素电解质温度酸碱度血清学反应具有高度特异性，如抗猪瘟病毒的抗体只能与猪瘟病毒结合，而不能与口蹄疫病毒结合。若抗原

2、之间含有部分共同抗原时，则发生交叉反应。特异性与交叉性抗原与抗体结合机理抗原和抗体的结合为弱能量的非共价键结合，其结合力决定于抗体的抗原结合位点与抗原表位之间形成的非共价键的数量、性质和距离，可分为高亲和力、中亲和力和低亲和力抗体。抗原与抗体在适宜的条件下就能发生结合反应。但对于血清反应，只有在抗原与抗体呈适当比例时，结合反应才出现可见反应，在最适比例时，可见反应最明显Ag浓度Ag–Ab复合物前带后带等价带免疫血清学反应的影响因素电解质特异性的抗原和抗体具有对应的极性基（羧基、氨基等），它们互相吸

3、附后，其电荷和极性被中和因而失去亲水性，变为憎水系统。此时易受电解质的作用失去电荷而互相凝集、发生凝集或沉淀反应。温度：通常在37度酸碱度：常用pH为6-8三、细胞免疫技术的种类淋巴细胞计数及分类技术淋巴细胞功能测定技术细胞因子检测技术体内细胞免疫试验四免疫制备技术的种类抗原制备抗体制备抗体纯化抗体标记抗原制备常见的抗原种类：细菌、病毒及其亚组分如果是活的微生物，还需要进行灭活处理抗体制备血清抗体制备按一定的免疫程序对实验动物进行一次或多次免疫。分离血清五、免疫学技术的应用动物疫病的诊断动植物生理

4、活动研究物种及微生物鉴定动植物性状的免疫标记生物制品研究动物疫病致病机理研究分子生物学研究六、免疫学技术的发展趋向第2节凝集反应细菌、红细胞等颗粒性抗原，或吸附在红细胞、乳胶颗粒性载体表面的可溶性抗原，与相应抗体结合，在有适当电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的凝集团块，称为凝集试验（agglutinationtest）参与的抗体主要是IgM和IgG。分为：直接凝集试验间接凝集试验一，直接凝集试验颗粒性抗与相应抗体直接结合并出现凝集现象的试验称为直接凝集试验（directagglutinat

5、iontest）分类：玻片法和试管法原理：抗原抗体结合形成可见反应。二，间接凝集试验将可溶性抗原（或抗体）先吸附于一种与免疫无关的，一定大小的不溶性颗粒（统称为载体颗粒）的表面然后与相应抗体（或抗原）作用，在有电解质存在的适宜条件下，所出现的特异性凝集反应称为间接凝集反应，以此建立的检测方法称为间接凝集试验（indirectagglutinationtest）间接凝集反应原理：++—载体：红血球：间接血凝试验乳胶颗粒：间接乳胶凝集试验二、抗原或抗体的检测方法第3节沉淀试验可溶性抗原如细菌的外毒素、

6、内毒素、菌体裂解液、病毒的可溶性抗原，血清等与相应抗体结合，在适量电解质存在下，形成肉眼可见的白色沉淀，称为沉淀试验（precipitationtest）参与的抗体主要是IgM和IgG。沉淀试验可分为液相沉淀试验和固相沉淀试验液相沉淀试验主要有环状沉淀试验和絮状沉淀试验等。固相沉淀试验主要是琼脂扩散试验和免疫电泳试验。(一)环状沉淀试验（ringprecipitationtest）小口径试管中进行，先加已知血清0.1ml，然后轻轻加入等量抗原，形成二个界面，数分钟后，二个界面间形成乳白色的沉淀环。

7、如：炭疽环状沉淀反应:Ascoli反应（二）琼脂凝胶扩散试验利用可溶性抗和抗体在半固体凝胶中进行反就，当抗原抗体分子相遇并达到适当比较时，就会互相结合、凝集，出现白色的沉淀线，从而判定相应的抗体和抗原。双向双扩散（doublediffusionintwodimension）双向单扩散（simplediffusionintwodimension）双向免疫扩散(doubleimmunodiffusion)：----定性检测Ag或Ab；Ab效价滴定AgAb扩散AgAb扩散1:21:41:81:161:3

8、21:64（二）沉淀反应三、免疫电泳技术免疫电泳对流免疫电泳３、免疫电泳（immunoelectrophoresis)+标本先电泳**************************两侧挖槽加Ab孵育后出现肉眼可见沉淀-（二）沉淀反应第4节标记抗体技术标记抗体技术是应用最为广泛的免疫血清学技术，主要有以下3大类。免疫荧光抗体技术免疫酶技术放射免疫分析免疫荧光抗体技术（immunofluoresecnceantibodytechnique）是指用荧光素对抗体或抗原进行标记，然后用荧光