脑损伤大鼠胫骨骨痂中降钙素基因相关肽的改变

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1、脑损伤大鼠胫骨骨痂中降钙素基因相关肽的改变【】目的探究脑损伤后大鼠胫骨骨痂中降钙素基因相关肽(CGRP)的变化及骨痂量的改变。方法将100只雄性entofOrthopaedics，PeopleHospitalofLiuzhou，guangxi545001，China)Abstract：ObjectiveTostudytherelationshipbetalealsofratseasured.X?rayplanefilmsofthefracturedtibialeasureareaofcallus.Callusm

2、unohistochemicalstaining.ResultsConcentrationofALPinserumofbraininjurygroupationandmoreCGRPimmunoreactivenervefibersincallusatearlystageafterbraininjury.StrongimmunoreactivityofCGRPidstcallusat3dand7dinbraininjurygroup.ThetibialfracturerecoversrapidlyandCGRP

3、inthecallu***presseshighlyafterbraininjury.ConclusionCGRPhavesignificanteffectonbonefracturehealing，theexpressionofCGRPshoodel?150，日本KONIC公司)，液压脑损伤模型由柳州医疗器械厂制作(参考方加胜教授)［2］，以上设备均由柳州市人民医院提供。主要试剂：试剂基金项目：广西科技厅青年基金(桂科青0447055)CGRP购于武汉博士德公司。EDTA?2NA(乙二胺四乙酸二钠)骨组织脱钙

4、试剂：瑞兴科技有限公司；磷酸盐缓冲液：福州迈新生物技术有限公司(批号701020060v)。检测方法均按试剂盒要求操纵，雄性12周龄L/kg)腹腔内注射麻醉后，常规往毛、备皮、碘伏消毒。显露右颅顶骨，中线旁2mm处开直径5mm骨窗，液压打击致中度脑损伤。复苏后，沿胫骨前外侧钝性分离进进到达胫骨干，在胫骨骨干中1/3段用摆锯锯断成横形骨折，以直径1mm克氏针作逆行髓内固定，经查骨折固定牢固后，生理盐水冲洗，封闭伤口，碘伏再消毒。骨折组头部只做颅骨开窗，正常对照组不做任何处理，术毕分笼饲养。1.2.3标本采集和处理

5、分别将受试大鼠经***(1mL/kg)腹腔内注射麻醉后，于术后第3、7、14、21、28天心脏取血正法，每组各10只，取血4～6mL离心后取血清贮存(－70℃)待测；待血清收集齐后一批进行检测碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)的含量。正法大鼠后立即取带骨膜和少许肌肉的右胫骨，照片后置于装有4％多聚甲醛(pH7.2)瓶中，标明动物编号、日期，放进4℃冰箱中固定24h。之后取出，充分水洗后，PBS液浸泡30min，放进10％乙二胺四乙酸钠(EDTA)pH7.3溶液中脱钙，每周换2次脱钙液，

6、经5周脱钙后，用针头能轻易扎穿骨皮质，则脱钙充分。接着进行骨痂的免疫组化操纵步骤。切片和胫骨纵轴垂直，连续切片，间距为6um。具体步骤参照试剂说明书。1.2.4计算机X线摄像仪(CR)摄片14、21、28d将大鼠完整的右侧胫骨干骨折标本经CR摄片(间隔：90cm，电压：40Kvp，电流：3.0mA)，观察大鼠胫骨骨折骨痂的连续性及骨折愈合情况。所得图像运用photoshop7进行处理，计算骨痂面积大小、不同骨痂比例。1.2.5免疫组织化学染色图像分析以目标均匀吸光度值为指标对所有标本切片的阳性信号进行量化。标本

7、切片置于光镜下，每个切片选取8个视野，放大400倍后，在相同曝光条件下摄片，同时将图像输进计算机Motic数码医学图像分析系统检测阳性目标均匀吸光度。均匀吸光度值表示阳性信号的强度。均匀吸光度值越大则信号越强，说明着色越深，抗原浓度越大。主要观察指标：骨折合并脑损伤组和骨折组大鼠术后不同时间点CGRP免疫组织化学染色的均匀吸光度值；骨折合并脑损伤组和骨折组大鼠术后不同时间点ALP在血清中的浓度；组织形态学观察，骨痂面积的丈量。1.3统计处理运用SPSS13.0软件行统计分析，对相关指标进行t检验和方差分析。P＜

8、0.05表示相比较的组别之间的差异有统计学意义。2结果2.1血清中ALP变化见表1。表1不同损伤组大鼠各时间点ALP变化2.2X线片观察将大鼠离体右侧胫骨干CR摄片，观察骨痂的连续性发现，各骨折组大鼠骨折端均未发现不愈合现象。骨折组骨折线清楚，骨痂量较少；脑外伤组骨性愈合较好，骨痂量较多，骨折线模糊。14、21d骨痂图像分析(见表2)，14、21d脑损伤组骨痂面积比[1][2]单纯骨折