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1、姜黄素、姜黄素与大黄素联用抗肝纤维化作用的实验研究【摘要】目的探讨姜黄素、姜黄素与大黄素联用的抗肝纤维化作用。方法以二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化模型造模结束后，分别给予姜黄素、姜黄素与大黄素联用进行治疗，检测肝功能、肝纤维化血清学指标，肝组织SOD,MDA和Hyp水平，取肝组织固定，HE、VG胶原染色，光镜观察肝组织的病理变化以及a-平滑肌在肝脏的表迖。结果姜黄素、姜大联用能明显降低肝纤维化大鼠血清ALT,AST,TNF-a,HA,LN,PCIII含量，降低肝组织MDA、Hyp含量，升高SOD水平。病理组织观察表明，姜黄素、姜大联用能减轻肝细胞坏死，抑制纤维组织增生
2、，改善肝组织结构，抑制a-SMA在肝内的表迗。结论姜黄素、姜大联用具有良好的抗肝纤维化作用。【关键词】姜黄素大黄素肝纤维化姜黄素、大黄素分别是温郁金、姜黄和虎杖的所含成分之一。姜黄素具有广泛的药理活性，能抗氧化、抗炎，抑制肝星状细胞的活化和增殖，而大黄素亦有上述作用。初步研究表明，姜黄素、大黄素能预防肝纤维的形成，以郁金、虎杖为主组成的复方虎金颗粒［1］具有良好的抗肝纤维化作用。为阐明中药复方产生效用的物质基础，我们探讨了姜黄素、姜黄素与大黄素联用对肝纤维化的治疗作用。1材料动物SPF级SD大鼠，雌雄各半，体重g，购自广州中医药大学实验动物中心，普通大鼠饲料喂养。药
3、物姜黄素、大黄素，均购自陕西旭煌植物科技有限公司，经HPLC检测纯度达90%以上，使用前用％羧甲基纤维素钠配制成不同浓度的混悬液。水飞蓟素，德国马博士大药厂生产，临用时用蒸馏水配成/ml的供试品液。试剂DMN购自日本株式会社，使用前用生理盐水配成%溶液备用。HA，LN，PCIII由北京北方生物技术研究所提供；TNF-a测试盒由北方生物试剂研究所提供;SOD,MDA,Hyp,考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。甲醛、苏木素、伊红、酸性品红、戊二醛等。仪器7060型全自动生化分析仪、SN-695B型放免Y测量仪，上海原子核研究所日环仪器厂。UV-754
4、型分光光度计，BX50显微镜，Olympus公司,2035石蜡切片机，德国Walldorf公司；E990数码摄像机，Nikon公司。2方法分组、造模及给药随机取SD大鼠8只为正常对照组。其它大鼠进行造模。将lmlD酮原液溶于2⑻ml生理盐水中，配制%DMN溶液，避光保存，2周内使用。参照文献［2］给药，每只大鼠给予%DMN腹腔注射，第1周前3d连续给2/3药量，后4d不给药，第2周开始前3d连续给全药量，后4天不给药，持续4周。正常对照组则给予相同量的生理盐水腹腔注射。造模结束后，将存活的大鼠随机分为6组，分别为模型对照组、水飞蓟素组、姜黄素高、低剂量组和姜大联用高
5、、低剂量组，每组8只。正常对照组和模型对照组灌胃蒸馏水，水飞蓟素组用药量分别为人临床剂量的5倍，即g/kg,姜黄素给药剂量为100mg/kg和200mg/kg，姜大联用剂量分别为50，10和100，20mg/kgo灌胃1次/d，每周灌6d。治疗4周后，实验结束。眼眶采血，分离血清，留取肝左叶定。观察指标及方法①观察大鼠一般状态包括：饮食变化、行为及毛发改变等；②全自动生化分析仪检测大鼠血清ALT,AST,TP,ALB,A/G；③放免法检测HA，LN，PCIII,TNF-a含量；④肝组织标本HE和VG胶原染色，光镜观察；⑤a-SMA免疫组化染色：常规SABC法染色，D
6、AB显色。肝胶原增生程度、肝纤维化分级采用Ishak法[3]0级：无肝纤维化；1级：纤维组织向部分汇管区扩大，伴有小纤维间隔；2级：纤维组织向大部分汇管区扩大，并伴有小纤维间隔；3级：纤维组织向汇管区扩大，并伴汇管区与汇管区桥接；4级：纤维组织向汇管区延伸，并有明显的汇管区与汇管区、汇管区与中央小叶区桥接；5级：纤维形成明显的汇管区与汇管区、汇管区与中央小叶区桥接，间或有假小叶形成；6级：肝内布满小圆形假小叶，假小叶内有粗大增生的胶原纤维。统计方法计量资料以均数土标准差土S表示，采用F检验，两两比较用q检验，用统计软件进行分析；计数资料采用Ridit分析。3结果姜黄
7、素、姜大联用对大鼠一般情况的影响正常对照组大鼠生长状态良好，体重增加显著，皮毛光滑，二便如常；大鼠注射DMN后，活动少，精神萎靡，喜睡少动，体重不增加甚至较前下降，尿黄，有腹泻，大鼠发生腹水产生率达70%。经姜黄素、姜大联用治疗后大鼠一般状态明显好于模型组，腹水的发生率明显降低。姜黄素、姜大联用对肝纤维化大鼠血清ALT,AST,TP,ALB,A/G的影响结果如表1。从表1可以看出，经DMN造模后，大鼠血清中ALT、AST的含量升高，TP，ALB,A/G的含量明显下降，与正常对照组比较均差异显著；经姜黄素、姜大联用治疗后，各组大鼠血清中ALT及AST的水平有不同程
