复方杠板归胶囊对慢性盆腔炎模型大鼠治疗作用及机制的研究

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1、贵阳医学院2011届硕士学位论文条件下股静脉采血5ml后，处死动物。打开腹腔，取大鼠双侧子宫组织，分别称重，右侧子宫置于中性甲醛固定液中固定。4.分析指标4.1组织形态学4.1.1子宫组织肉眼观察及HE染色肉眼观察子宫组织的形态学改变；右侧子宫组织,4%中性甲醛固定、脱水，常规石蜡包埋，病制成4μm的切片,采用苏木素-伊红进行染色。4.1.2镜下观察大鼠子宫组织形态学变化每组取10只大鼠的右侧子宫标本，中性甲醛固定液固定，送贵医附院病理科做HE染色，观察大鼠子宫组织形态学变化。参照文献[6]，对子宫组织是否出现宫

2、腔粘连或扩张、腔壁结构改变、上皮细胞变性坏死、炎细胞浸润、内膜充血水肿等进行评价。病理观察指标及评价标准：（1）宫腔粘连或扩张：“-”为无病变；“+”为小于1/3病变；“++”为1/3－2/3病变；“+++”为2/3以上病变。（2）腔壁结构改变：“-”为各层结构正常；“+”为粘膜固有层腺体消失；“++”为基层与粘膜层分界不清；“+++”为分层结构不清。（3）上皮细胞变性或坏死：“-”为单层柱状上皮；“+”为上皮细胞扁平或脱落小于1/3病变；“++”为上皮细胞扁平或脱落1/3－2/3病变；“+++”为上皮细胞扁平或

3、脱落2/3以上病变。（4）炎细胞侵润：“-”为无炎细胞侵润；“+”为小数散在或灶性且仅在粘膜固有层内；“++”为散在或灶性但深入肌层；“+++”为多数或层状浸润并累及全层。（5）内膜充血或水肿：“-”为无内膜充血水肿；“+”为固有膜轻微充血水肿；“++”明显充血水肿；“+++”为全层充血水肿。4.1.3镜下炎性细胞计数:400倍光学显微镜下，通过摄像头采集HE染色切片图像信号，输入图像分析系统。每组随机选取8例标本，每例标本随机选取5个视场，每个视场采用鼠标点击法计数炎细胞数及细胞总数，以每个视场炎细胞/细胞总数

4、的比值（%）进行数据统计。4.1.4子宫肿胀率与抑制率取双侧子宫，精密天平称重，以两侧子宫重量差为肿胀程率指标，计算肿胀5贵阳医学院2011届硕士学位论文率和抑制率：肿胀率=（右侧子宫的重量-左侧子宫的重量）/左侧子宫重量×100%；抑制率=（模型组子宫平均肿胀率—给药组子宫平均肿胀率）/模型组子宫平均肿胀率×100%；4.细胞因子4.1ELISA法检测血清NF-κB、IgG、IL-6、TNF-α含量（1）血清制备：股静脉采血5mL，3000rpm/min，离心10min，吸取上清，分装，在-20℃保存备用；（2

5、）从2-8℃取出试剂盒，室温下平衡30分钟后充分混匀。避免液体产生大量泡沫；（3）预先包被抗体的酶标孔分别设空白孔、标准品孔、待测样品孔。每个空白孔做复孔，共8个空白孔。将标准品原液倍比稀释为8个浓度；待测样品按照1:5比例稀释。每个标准品、样品各做1个孔；（4）加入稀释好的标准品50μl于反应孔，在待测样品孔中加入稀释好的待测样品。摇床震荡摇匀，空白对照孔不加。37℃恒温温育30分钟；（5）弃去液体，甩干，每孔加满PBS洗涤液，震荡30秒，甩去洗涤液，吸水纸拍干。重复5次；（6）每孔加入50μl的亲和链霉素-H

6、RP标记的酶标记，轻轻震荡混匀，37℃恒温温育30分钟；（7）甩去孔内液体，每孔加满PBS洗涤液，震荡30秒，甩去洗涤液，吸水纸拍干。重复5次；(8)每孔依次加入显色剂A、B各50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光温育10分钟。避免光照；（9）取出酶标板，迅速加入50μl终止液，终止反应，酶标孔内蓝色立转黄色；（10）450nm波长处测定各孔OD值；(11)以空白孔均值调零，以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应标准品浓度为横坐标（X），绘制标准曲线，计算出标准曲线的回归方程式，将样品OD值代入方程式，计算出样品浓度。待

7、测样品的实际浓度应乘以总稀释倍数5。6贵阳医学院2011届硕士学位论文y=0.0022x+0.0805 R=0.99664.24.114.1.1002004006008001000浓度图2NF-κB标准曲线及计算公式Fig.2StandardcurveandcalculationformulaofNF-κBy=0.002x+0.1874 R=0.997521.510.500100200300400500600700800900浓度图3IgG标准曲线及计算公式Fig.3Standardcurveandcalcula

8、tionformulaofIgG7贵阳医学院2011届硕士学位论文4.4.1y=0.0081x+0.2296R=0.99084.1.11.50.50.80.60.40.20.0020406080100120140160180浓度图4IL-6标准曲线及计算公式Fig.4StandardcurveandcalculationformulaofIL-6y=0.007x+0.41