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1、石菖蒲中总氨基酸的含量测定【摘要】目的建立了内蒙古石菖蒲中总氨基酸的含量测定方法。方法采用分光光度法。结果标准曲线方程A=0.0011C-0.0199(r=0.9993)，平均回收率为97.10%，RSD为0.95%(n=6)。该法测得石菖蒲中总氨基酸的含量为0.62%，与氨基酸自动分析仪所测得的石菖蒲中总氨基酸的含量一致。结论该方法灵敏、简便、快速、准确可靠。【关键词】石菖蒲;总氨基酸;分光光度法Abstract：ObjectiveToestablishamethodfordeterminationoftota
2、laminoacidinA.tatarinoetryethodissimple,rapidandreliable.Keyinoacid;Spectrophotometry石菖蒲系天南星科（Araceae）菖蒲属（Acorus）石菖蒲A.tatarinol,分别置25ml量瓶中,加水稀释到刻度,摇匀,精密量取上述两种溶液及对照品溶液2.0ml,分别置25ml量瓶中,照含量测定法,自“加水4.0ml”起,制备供试品,在紫外可见分光光度计上扫描。结果,样品与对照品均在570nm处有最大吸收,而阴性对照无干扰,故选择本品
3、的检测波长为570nm。2.2对照品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的L-精氨酸对照品5.015mg,置50ml容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得(每毫升含精氨酸100.3μg)。2.3标准曲线的制备分别精密吸取精氨酸标准液0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0ml,置25ml量瓶中,分别加入水6.0,5.0,4.0,3.0,2.0,1.0,0.0ml,各加磷酸盐缓冲液(pH8.0)0.5ml,再加2%茚三酮乙醇溶液0.5ml,摇匀,置水浴中加热15min,取出,放冷,分别加入蒸馏水至
4、刻度,摇匀,以第1份为空白,采用分光光度法〔4〕，在570nm波长处测定吸收度。以对照品加入量为横坐标,吸收度为纵坐标,绘制标准曲线（见图1）。经回归统计,得标准曲线方程：A=0.0011C-0.0199,r=0.9993表明精氨酸浓度在1.003～6.018μg范围内与吸收度呈良好的线性关系。2.4样品溶液的制备取石菖蒲药材饮片5g，加水50ml，煎煮两次，1h/次，煎煮液过滤后，调pH至4,通过732型强酸性H型阳离子交换树脂柱,用蒸馏水洗至中性,再用2mol/L氨水缓慢洗脱,直至洗脱液不显茚三酮反应,收集洗
5、脱液,浓缩，低温蒸干，得干膏38.93mg。精密称取干膏约20mg,蒸馏水定容于25ml量瓶，备用。2.5精密度实验精密量取样品溶液5.0ml,照含量测定法,制备供试品,连续测定5次,结果RSD=0.81%,表明本方法的精密度良好。2.6稳定性实验精密量取本品5.0ml,照含量测定法,制备供试品,分别于0,15,30,45,60,90min测定,结果RSD=0.93%,表明本品供试品溶液在1.5h内稳定性良好。2.7重复性实验取石菖蒲药材饮片5g，照样品溶液的制备方法，重复制备5份样品,照含量测定法，分别进行测定
6、,结果RSD=0.46%,表明本方法的重复性良好。2.8加样回收实验精密称取已知含量的石菖蒲药材饮片2.5g,置50ml量瓶中，分别加入L-精氨酸对照品约15mg,照样品溶液的制备方法，重复制备6份样品,照含量测定法，分别进行测定,计算回收率，结果表明，L-精氨酸的加样回收率为97.10%，RSD为0.95%，结果见表1,表明本法具有良好的回收率。 3结果与分析3.1样品含量测定取本品精密量取样品液5.0ml,置25ml量瓶中,加水稀释到刻度,摇匀,精密量取2.0ml,置25ml量瓶中,加水4.0ml,磷酸盐缓
7、冲液(pH8.0)0.5ml,再加2%茚三酮乙醇溶液0.5ml,摇匀,置水浴中加热15min,取出,放冷,加蒸馏水至刻度,摇匀,在570nm波长处测定吸收度,随行空白,从标准曲线上读出供试品溶液中总氨基酸的重量,计算,即得样品的测定结果见表2。表1样品加样回收实验结果表2石菖蒲中总氨基酸含量测定结果3.2酸度的影响在用强酸型阳离子交换树脂富集石菖蒲中氨基酸时，将药材提取液分别用2mol/L盐酸调pH2，4，5，6后，再分别过阳离子交换树脂柱，结果表明：药材提取液调pH至4时，树脂对氨基酸的吸附最完全。3.3上样流
8、速的影响在用强酸型阳离子交换树脂富集石菖蒲中氨基酸时，当上样流速为1ml/min时，树脂对氨基酸的吸附最完全。3.4树脂柱径高比的影响分别将调pH至4的药材提取液经过径高比为1∶30，1∶50，1∶70的强酸型阳离子交换树脂柱，结果表明：径高比为1∶50和1∶70的明显优于径高比为1∶30的树脂柱，但径高比为1∶50和1∶70的没有很大差异，故选用径高比为1∶50的树脂柱
