临床细菌室厌氧菌培养基本程序-张秀珍

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1、临床细菌室厌氧菌培养基本程序张秀珍内容厌氧培养基本设备厌氧标本采集和运送步骤厌氧菌的分离和鉴定步骤厌氧菌的报告厌氧菌的药敏试验厌氧菌的菌种保存厌氧培养基本设备厌氧菌培养的基本条件及设备设备北京医院细菌室采用方式生产厂商床边采样设备厌氧袋试验合，内含气体发生器及指示剂共20套(45534)法国生物梅里埃输送培养基Amies输送琼脂(41998、41999)难辩梭菌琼脂(43213)法国生物梅里埃常规准备培养基厌氧血琼脂或斯氏琼脂+5%羊血(43273)斯氏万古霉素+5%羊血(43223)自制或法国生物梅里埃厌氧气袋厌氧气体发生器10个/盒(96121)法国生物梅里埃厌氧盒或厌氧罐5

2、～10个厌氧盒(96127)：法国生物梅里埃厌氧罐：英国OXOID公司法国生物梅里埃厌氧培养的培养基初代接种厌氧菌最好使用新配制的培养基。平板培养基无需在厌氧条件下贮存，用前可进行预还原，但厌氧条件下贮存可延长培养基的有效期。实验室常规准备厌氧培养分离的培养基是厌氧血琼脂.必备厌氧培养用培养基斯氏琼脂+5%羊血：适用所有厌氧菌生长斯氏万古霉素+5%羊血：适用革兰阴性厌氧菌的分离难辩梭菌选择培养基(CCFA)：分离难辩梭菌改良厌氧血平皿改良厌氧血平皿配制成分：血琼脂基础按配方半胱氨酸：0.4克氯化血红素(5mg/ml):1ml1%维生素K1:0.1ml配制方法:上述各成分混合，加热

3、溶解冷却后调整pH7.4。高压灭菌后冷却至50℃时加入5-10%的脱钎维羊血，混合后倾注平皿。用途：营养好可供大多数厌氧菌生长质量控制：产黑色素普雷沃菌形成典型菌落和色素；产气夹膜梭菌有双圈溶血。几种重要的厌氧选择培养基卡那霉素、万古霉素溶血平板(KVB)：类杆菌属，特别是脆弱类杆菌和产黑色素拟杆菌、卡那霉素胆盐七叶苷平皿(BBE)：脆弱类杆菌环丝氨酸、先锋克西叮、果糖、蛋黄平皿(CCFA)：难辩梭菌提供厌氧环境方法：使用厌氧罐+换气法、厌氧罐+产气袋法厌氧袋+产气袋法厌氧手套箱法。配指示剂厌氧培养装置厌氧手套箱：价格昂贵、操作时间长、气体消耗大、不易推广厌氧盒+厌氧气袋：应用最

4、普遍、简便或厌氧罐+厌氧气袋：方便实用厌氧罐抽气换气法：需配置抽气换气装置第二代厌氧气体发生剂不需加水、不需触酶厌氧标本的选择、采集和运送可疑厌氧菌感染特征感染局部产生气体分泌物有恶臭分泌物带血或呈黑色粘膜周围的感染，如肛周、口腔、鼻窦、咽颊等细菌培养阴性，但有菌血症表现长期使用氨基糖苷类抗生素，但无效者有基础疾病免疫低下者需做厌氧血培养的高危人群肠脓毒症、女性生殖道感染、褥疮及呼吸道感染患者ICU患者或近期做过腹部外科手术的患者严重烧伤和外伤患者伴有严重心血管疾病、糖尿病、恶性肿瘤、移植和免疫抑制患者老年患者临床高度怀疑有厌氧菌感染的患者绝大多数住院患者需要做厌氧血培养1.正确

5、地选择标本下列细菌学指征有助于选择标本做厌氧培养：（1）深部伤口或软组织脓肿的脓，特别是伴有恶臭或含有硫磺颗粒时。（2）可疑为气性坏疽或少见的严重产气或坏死性感染所取得的坏死组织或病灶清除材料。（3）粘膜部位的感染灶取得的材料。（4）从脑、肺、肝或其他器官的脓肿或从腹腔内、肛周、隔下或其他部位的脓肿取得的材料。（5）无菌区感染灶的吸出液(包括血液、脑脊液、腹水、胸水、滑膜液、羊水等)。（6）人或动物咬伤感染灶取得的材料。（7）变黑的或置于紫外线发红色荧光的渗出物。（8）革兰染色，镜下见到具有厌氧菌独特形态的材料。（9）可疑引起肉毒杆菌食物中毒的食物。2.正确地收集

6、标本不能做厌氧培养的标本：（1）咽、鼻、尿道或直肠拭子。（2）咳出的痰，通过支气管镜取的分泌物，排出或导出的尿、粪及胃内容物。可做厌氧培养的标本（1）从未开放的脓肿抽取脓液。（2）通过胸腔穿刺抽出的胸腔液。（3）从耻骨联合上方做膀胱穿刺吸出或从肾造口管收集的尿。（4）气管切开吸取的肺分泌物。（5）女性生殖器：后穹隆穿刺。（6）穿刺抽出的腹腔液。（7）通过腰椎穿刺抽出的脑脊液。（8）窦道标本可插入小导管用注射器吸出，注射器和针头内的气体应全部排出，将其内容物直接注入一个已排出气的无菌试管内。也可自窦道损伤部位取材做活组织检查。3.床边采集标本的步骤1.除去表面陈旧的脓和分

7、泌物,从深处吸出或刮取标本.2.首先接种在厌氧培养基,立即置厌氧盒或厌氧罐内,同时撕开并放入产气袋,放指示剂,立即盖好盖或封好厌氧袋口.3.剩余部分标本种需氧培养基4.剩余最后标本作涂片两张5到达实验室后，将已接种需氧和厌氧的培养皿置35度培养4.血液以外无菌体液接种胆汁、胸腹水、脑脊液等无菌体液：按比例直接种入厌氧血培养瓶中抽取标本种入厌氧增菌培养基，同时接种厌氧血平皿，全部放厌氧罐，立即放入厌氧产气袋并立即盖好盖，放35度培养48h。5.不能立即接种的厌氧标本1.由主管医生采