用正交法测定几种因素对酶活力的影响实验报告

《用正交法测定几种因素对酶活力的影响实验报告》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、用正交法测定几种因素对酶活力的影响一、前言正交实验法正交实验法就是利用排列整齐的表-正交表来对试验进行整体设计、综合比较、统计分析，实现通过少数的实验次数找到较好的生产条件，以达到最高生产工艺效果。正交表能够在因素变化范围内均衡抽样，使每次试验都具有较强的代表性，由于正交表具备均衡分散的特点，保证了全面实验的某些要求，这些试验往往能够较好或更好的达到实验的目的。正交实验设计包括两部分内容:第一，是怎样安排实验;第二，是怎样分析实验结果。酶活力酶活力（enzymeactivity）也称为酶活性，是指酶催化一

2、定化学反应的能力。酶活力的大小可用在一定条件下，酶催化某一化学反应的速度来表示，酶催化反应速度愈大，酶活力愈高，反之活力愈低。测定酶活力实际就是测定酶促反应的速度。酶促反应速度可用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。在一般的酶促反应体系中，底物往往是过量的，测定初速度时，底物减少量占总量的极少部分，不易准确检测，而产物则是从无到有，只要测定方法灵敏，就可准确测定。二、实验目的1.学习并掌握正交法应用原理。2.采用正交法测定多种因素对酶活力的影响。三、实验原理酶促反应常常同时受到多种因素

3、(包括激活剂和抑制剂等)的交互影响，可采用正交法进行综合研究，即通过少量试验收到更好的效果：多快好省。本实验以正交法同时测定[S]、[E]、温度和pH值对trypsin活性的影响，以求得酶活最大时相应影响因素的最佳值(水平)，并借此初步掌握正交法的使用。四、实验器材和试剂实验器材：①试管②漏斗③温度计④吸管⑤恒温水浴锅⑥分光光度计实验试剂：①2%血红蛋白液(Hb)②15%三氯醋酸液(TCA)③trypsin酶液④0.04mol/L巴比妥缓冲液(pH7,8,9)⑤考马斯亮蓝染液五、实验操作1.实验设计本实验

4、为四因素三水平(总试验次数34=81)，可选用L9正交表（仅需9次试验)，展开后其特性为均衡搭配（1）每列中水平数1、2、3出现次数相同，均为3次；（2）每两列的横行数对(1-1/1-2/…/3-2/3-3)各出现一次。列号试验号12341111121222313334212352231623127313283213933212.将各因素及其相应水平参数依次填入得到实验安排表试验号试剂/ml1682493572%血红蛋白液0.20.50.80.20.50.80.20.50.8缓冲溶液pH72.6pH81.

5、7pH91.7pH82.3pH92.3pH72.0pH92.0pH72.0pH82.037℃预温5min50℃预温5min60℃预温5min酶液0.20.80.50.50.20.80.80.50.237℃反应10min50℃反应10min60℃反应10min（1）各试管编号，分别加入对应容量的底物(2%Hb)和相应pH值的缓冲液，混匀；（2）同温处理的3支试管同时预温5min；（3）各试管依序分别加入对应容量的trypsin酶液(统一加样时间间隔)，混匀；（4）同温处理的3支试管置对应恒温水浴中反应10m

6、in；（5）各试管依次加入15%三氯醋酸液2ml，混匀以终止反应；（6）非酶促对照：另取一试管，先加入2%血红蛋白液0.5ml及pH8缓冲液2.0ml，再加15%三氯醋酸液2.0ml，混匀静置10min后再加入酶液0.5ml；（7）上述各管反应液室温静置15min后过滤，取滤液待测酶活；（8）酶活测定(考马斯亮蓝法，标准曲线制备略)：取试管若干支编号，分别加入对应的样品滤液1.0ml及考马斯亮蓝液4.0ml，混匀，室温静置3min，以非酶促对照管为空白，于波长595nm比色测定。3.数据记录及分析将各管测

7、定所得光密度值对应填入表格，分别算出各因素一、二及三水平的试验结果总和Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ，并分别取其平均值计算相应的极差(各列中最大与最小值之差)；比较各因素极差的大小以评估各因素对酶活的影响，并对酶活最高时的各因素水平作一直观分析。六、实验结果及数据处理1.实验数据：pH值温度pH7pH8pH9测量值平均值测量值平均值测量值平均值37℃0.0030.00230.0680.06670.1850.18400.0020.0660.1850.0020.0660.18250℃0.0590.05600.0960.09670

8、.0790.08100.0580.0970.0820.0510.0970.08260℃0.1400.14170.1630.16100.0650.06600.1410.1590.0640.1440.1610.0692.实验数据处理分析：列号试验号1[S]/ml2[E]/ml3温度/（℃）4pH试验结果A680nm12345678910.210.210.220.520.520.530.830.830.810.220.530.810