非小细胞肺癌组织中sp70的表达及意义

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1、非小细胞肺癌组织中SP70的表达及意义　　摘要：目的初步探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织中SP70抗原表达的临床意义。方法采用RT-PCR法检测40例肺癌组织（NSCLC32例，小细胞肺癌8例）和20例肺良性病变组织中SP70抗原表达的相对水平，半定量分析其临床意义。结果肺癌组SP70平均表达水平明显高于肺良性病变组（P0.05）。结论SP70可能是评价NSCLC的一个潜在的指标。　　关键词：SP70抗原；非小细胞肺癌；RT-PCR　　Abstract：ObjectiveToinvestigatethenon-smallcelllungcancer（NSCL

2、C）clinicalsignificanceofexpressionofSP70antigenintissues.MethodsRT-PCRmethodwasusedtodetect40casesoflungcancer（32cases，NSCLC8casesofsmallcelllungcancer）relativetothelevelofexpressionofSP70antigenand20casesofbenignlunglesion，semiquantitativeanalysisanditsclinicalsignificance.ResultsT

3、hemeanlevelofSP70inlungcancergroupwassignificantlyhigherthanthatinbenignlungdiseasegroup（P0.05）.ConclusionSP70maybeapotentialindicatorofNSCLC.　　Keywords：SP70antigen；Nonsmallcelllungcancer；RT-PCR　　非小?胞肺癌（NSCLC）约占所有肺癌的80%，其死因大多是由于肺癌早期诊断率低且预后差[1]，寻求肺癌早期检测指标及方法成为目前研究热点。近年来，潘世扬等[2-3]研究发现

4、一株能特异性识别NSCLC的McAbNJ00l，此抗体对NSCLC的免疫性诊断和治疗意义重大，其所针对的靶抗原为相对分子质量70000的胞浆新抗原SP70，SP70与NSCLC关系密切。本实验采用RT-PCR法检测40例NSCLC组织和15例良性病变肺组织中SP70的表达水平，分析其表达与临床特征的关系，评价其在临床诊治中的应用价值。　　1资料与方法　　1.1一般资料取我院2014年3月～2015年3月手术切除的未经放化疗的肺肿瘤标本40例，另取20例手术切除的肺良性病变组织作为对照，全部标本均有病理确诊，收集后立即保存于-80℃冰箱。Trizol液和逆转录试

5、剂盒购自美国Invitrogen公司。引物由北京诺赛基因公司设计并合成，目的基因SP70F：5′-CCAGTTCAAGTGCTCGGCAT-3′；R：5′-TTGCTCTTGGAACCTCGGAC-3′。内参β-actinF：5′GTGACGTTGACATCCGTAAAGACC-3′；R：5′-CTAGGAGCCAGGGCAGTAATCT-3′。　　1.2实验方法按Trizol裂解抽提法进行总RNA的提取。常规检测RNA的浓度、纯度及完整性。按逆转录试剂盒提供的方法合成cDNA存放-20℃冰箱备用。25μlRT-PCR扩增体系：PCRreactionmixtu

6、re12.5μl，上、下游引物（10pmol/μl）各1μl，cDNA模板1μl，ddH2O10.5μl。反应条件：94℃预变性5min，94℃40s，55℃30s，72℃40s，共30个循环，每份样本重复3次。　　1.3统计学方法用SPSS17.0软件对实验数据进行统计分析。统计数据采用灰度值表示，以β-actin灰度值为参照，标化计算各样本数据，从而获得SP70的相对模板数，即：SP70/β-actin。计量资料采用（x±s）表示，两样本均数的比较采用t检验；以P<0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1目的片段将PCR产物进行2%琼脂糖凝胶电泳分

7、析证实PCR产物长度与目标基因SP70长度一致，最后经测序确认为目的产物，如图1。　　2.2SP70的表达比较肺癌组SP70平均表达水平明显高于肺良性病变组，差异有统计学意义（P0.05），见表1。　　3讨论　　相关研究[2-4]指出SP70是一种针对NSCLC的特异性蛋白靶标，其存在于癌细胞的胞膜和胞浆，可促进癌细胞增殖，是肺癌检测诊断的分子靶标，同时也是抗肺癌治疗靶点，SP70对于肺癌的诊治意义重大。彭?c[4]等采用ELISA方法检测NSCLC患者中外周血液中SP70的表达，结果发现NSCLC组SP70阳性率明显高于对照组，提示SP70可能是诊断NSCL

8、C的潜在血清肿瘤标志物。亦有研究[5-