体外培养人牙周膜细胞方法的探讨.doc

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1、体外培养人牙周膜细胞方法的探讨编辑。作者：张丽，王永，张军梅，侯豫，吴承龙，王文秀【摘要】目的：研究如何提高体外培养人牙周膜细胞的成功率，为简便、快速地获得大量成活率高的hPDL膜细胞，建立体外细胞模型提供一定的实验方法。方法：利用3种不同方法进行牙周膜细胞的原代培养，用形态学、免疫细胞化学染色等方法鉴定细胞来源；通过生长曲线的测定研究体外细胞生长特性。结果：3种方法获得的细胞形态和生物学行为大致相同；波丝蛋白抗体染色阳性，角蛋白抗体染色阴性。组织块法培养的细胞同源性好，但初代培养时间长；全牙消化法的原代

2、培养成功率高于其他2种方法。结论：通过对牙周膜细胞培养方法的改良，可以显著提高hPDL原代培养的成功率。【关键词】牙周膜；细胞培养；免疫组织化学[Abstract]Objective：ToestadtoevaluatethebiologicalfeaturesofhPDLcells.ResuIts：Morphologicalandbiologicalcharacteristicsofcellsculturedwiththe3kindsofmethodweresimilar.Theywerespindle-

3、shaped,andshowedpositivereactiontoantibodiesagainstvimentin,andnegativereactiontoantibodiesagainstkeratin.Cellsobtainedwithtissueexplantshowedbetterhomology,butneedlongerculturetime；ThesuccessrateofprimaryhPDLcellcultureintoothenzymaticdigestiongroupwassi

4、gnificantlyhigherthanthoseintheother2groups.Conclusion：Bymakingimprovementinspecimencollectingandculturingmethods,thesuccessrateofprimarycultureofhPDLcellscanbenoticeablyincreased.blishasimpleeriodontalliersuccessratedusingthreeisandimmunocerizethecell，fa

5、st,andeffgamentcelline.Methord：Prdifferentmetytochemicalslineage,andgicienttechnivitrocultivaimaryhPDLcelhods.Morpholtainingwereurowthcurveasqueforhumanptionwithhighlswereculturogicalanalyssedtocharactsaywasadopte［Keywords］periodontalligament；cellculture；

6、immunohistochemistry细胞体外分离培养是研究复杂的生物系统的重要手段，细胞培养条件下，将细胞从复杂的体内环境转移到较为简单的体外环境，可对细胞学研究中的变量进行分离和控制。上世纪70年代以来，国外学者对牙周膜细胞分离纯化进行了大量的探索和研究，且成功地从猴、猪、人等牙周膜分离培养出牙周膜细胞［1〜3］。人牙周膜细胞分离培养主要有酶消化法和组织贴块法［4］。国内外学者对这2种方法评价不一，并且在这2种方法的基础上进行改进提出了酶消化组织块法和全牙消化法［5］。对组织块法、酶消化组织块法和全

7、牙消化法这3种方法做了一些比较，以寻求hPDL体外培养的最佳方法。1材料和方法试剂及主要实验仪器设备a-MEM培养液，胶原酶，胎牛血清，胰蛋白酶，青霉素100U/ml,链霉素lOOmg/L;SABC免疫组织化学试剂盒，角蛋白抗体及波丝蛋白抗体，二氧化碳恒温培养箱，倒置相差显微镜，血球计数板。方法组织块法培养hPDL取材：选择健康青少年正畸拔除的健康的双尖牙，超净工作台内用刀片仔细刮除附着牙龈及根尖组织，用D-Hanks液冲洗3次；无菌处理：将牙冠浸入%次氯酸钠溶液中2min，再用含高浓度双抗的D-Haks

8、液冲洗2遍。按照司徒镇强［6］传统组织块培养法进行原代培养；传代：细胞汇合至培养瓶80%时，用％的胰蛋白酶消化液1:2消化传代。酶消化组织块法培养hPDL酶消化组织块法原代培养在取材、无菌处理上与组织块法相同。刮下根中2/3的牙周膜后，不剪，移入离心管内。％胶原酶37°C消化30min，其中，每5min振荡1次，当肉眼观察到培养液略混浊，显微镜下见组织块松散时，离心，弃上清液，用含血清及双抗的培养基漂洗1次后弃上清液，收集组织