gpⅰbαkozak

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1、GPⅠbαKozak：余秉东，胡建华，贾绍斌，张学虎【摘要】目的探讨GPⅠbαKozak-5T/C基因多态性与冠心病相关性。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析检测208例宁夏回族人群(冠心病组96例，对照组112例)Kozak-5T/C基因型及等位基因频率。结果208例宁夏回族人群GPⅠbαKozak-5T/C基因CC、CT和TT三种基因型分布频率分别为8.6%、23.1%和68.3%，C和T等位基因的分布频率分别为20.2%和79.8%。112例对照组CC、CT和TT三

2、种基因型的分布频率分别为8.9%、23.2%和67.9%，C和T等位基因的分布频率分别为20.5%和79.5%；96例冠心病组的CC、CT和TT三种基因型的分布频率分别为8.3%、22.9%和68.8%，C和T等位基因的分布频率分别为19.8%和80.2%。GPⅠbαKozak-5T/C基因多态性在冠心病组及对照组之间的分布差异无统计学意义(χ21=0.029，P1=0.986；χ22=0.036，P2=0.851)。结论GPⅠbαKozak序列-5T/C基因多态性与冠心病的发生未见相关性。【关键词】回

3、族；冠状动脉粥样硬化性心脏病；血小板膜糖蛋白；基因多态性冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)是目前临床上常见的心血管疾病，在所有心血管病致死原因中所占比例最大。血栓形成是导致冠脉闭塞的主要病理改变。血小板膜糖蛋白GPⅠbα是血小板膜上含量最多的糖蛋白，可结合血管性血友病因子(v)、左前降支(LAD)、左回旋支(LCX)、右冠状动脉(RCA)中至少有1支血管内径狭窄≥50%为阳性。对照组，共112例，男63例，女49例，平均年龄(58.63±10.82)岁，冠脉造影阴性。所有对象肝肾功能正常，来自宁夏回族人

4、群，相互间无血缘关系。冠心病组与对照组在吸烟史、高血压、糖尿病、血清高密度脂蛋白(HDL-c)和低密度脂蛋白(LDL-c)水平差异均无统计学意义(P＞0.05)，冠心病组平均年龄及男性比例大于对照组(P＜0.05)。1.2方法采集外周静脉血2mL，枸椽酸钠抗凝，低渗溶血法获得白细胞，以常规酚/氯仿抽提法提取DNA，TE溶解后于-70℃保存。Kozak序列-5T/C基因分型采用聚合酶链反应(PCR)，使用引物为：上游5'-GGAGATGGGAGTAGGGAGGACAG-3'，下游5'-TCAGGGTTGC

5、CAGGGAGAAG-3'(由北京奥科生物技术有限责任公司合成)。PCR产物长度为343bp，用能识别T等位基因的限制性内切酶AvaⅡ消化，形成135bp和208bp的两个片断。酶切体系为20μL，包括10μL的PCR产物，限制型内切酶AvaⅡ5U及酶切缓冲液。酶切体系在37℃水浴1h。PCR及酶切产物于2%琼脂糖电泳(溴化乙锭染色法)进行检测分型。用紫外凝胶成像系统判定结果。1.3统计学方法数据均用SPSS13.0统计软件分析处理。基因型和等位基因频率等计数资料采用χ2检验，计量资料用(±s)表示，组

6、间比较用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。2结果2.1Kozak序列-5T/C基因型和等位基因分布Kozak序列-5T/C基因型的PCR扩增片段大小为343bp，经能识别T等位基因的限制性内切酶AvaⅡ消化，形成135bp和208bp的两个片断。基因型判定标准如下：CC基因型(343bp)，CT基因型(135bp，208bp，343bp)，TT基因型(135bp，208bp)。PCR产物及酶切结果见图1。基因型和等位基因频率见表1。实验组、对照组的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡，

7、具有群体代表性。各基因型及等位基因分布在冠心病组与对照组之间差异无统计学意义(χ21=0.029，P1=0.986；χ22=0.036，P2=0.851)。表1实验组和对照组基因型分布和等位基因频率2.2基因型和等位基因与冠心病病变程度的关系冠心病单支病变和多支病变组3种基因型和等位基因分布差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表2。表2基因型和等位基因频率与冠心病病变程度的关系　　3讨论血小板膜糖蛋白GPⅠbα基因Kozak序列-5T/C位于起始蛋氨酸密码子上游第5个碱基对处，其基因多态性可能影响血小

8、板表面GPⅠbα的密度，-5C等位基因有较高的GPⅠbα表达水平［5］，从而可能增加血栓形成和梗死。研究表明［6-9］，GPⅠbα的基因多态性与血栓性疾病(静脉血栓、心肌梗死、中风等)有关，但结果并不一致。MeiselC等［6］研究了冠心病组与对照组各1000例，其中冠心病组中269例行经皮经腔冠状动脉成形术(PTCA)，103例行定向旋切术，278例植入支架，联合终点是目标血管重建、心梗和死亡，随访30d，结果发现GPⅠbα-5C等位基因