丙戊酸钠抑制hl

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1、丙戊酸钠抑制HL.freelvalproate；VPA）对白血病细胞HL-60的增殖、凋亡和分化的影响，采用MTT法检测不同浓度的VPA对HL-60细胞增殖的作用；细胞化学染色法观察药物作用后细胞形态的变化；NBT还原实验结合形态学作为观测细胞分化指标；应用流式细胞术检测不同浓度药物作用后细胞周期的变化及凋亡细胞的比例。结果显示：VPA能明显抑制HL-60的增殖；经2mmol/LVPA处理24-48小时后，HL-60出现胞浆空泡、核固缩、核碎裂及凋亡小体；AnnexinV阳性的早期凋亡细胞比例由2.9%升高到17.1%；

2、流式细胞术检测出明显的亚二倍体峰；G1期细胞由51.1%增加至84.6%，S期细胞由37.9%减低至14.4%。0.25mmol/LVPA作用1周后.freelicCellLineHL-60bySodiumValproateAbstractToinvestigatetheinfluenceofsodiumvalproate(VPA)onproliferation，apoptosisanddifferentiationofHL-60cellline，effectofVPAinvariousconcentrationsonp

3、roliferationofHL-60cellssastainingedtoobservethemorphologicchangesofHL-60cells；NBTexperimentetrymol/LVPA，thecellsexhibitednuclearshrinkage，pyknosisfragmentationandappearenceofapoptosisbodies.ThepercentageoftheannexinV+/PI-cells2.9%to17.1%；hypodiploidpeak51.1%to84

4、.6%andthecellsinSphasedecreasedfrom37.9%to14.4%.Afteramol/LVPA，thecellsexhibitedcharacteristicsofdifferentiation.ThepercentageofNBTpositivecellsechanismneedstobefurtherstudied.Keyvalproate；HL-60cell；cellproliferation；cellapoptosis；celldifferentiation组蛋白脱乙酰基酶（hist

5、onedeacetylase，HDAC）抑制剂在体外对于多种肿瘤细胞系有抑制细胞增殖、诱导凋亡及分化的作用。HDAC抑制剂对肿瘤细胞有选择性细胞毒性，而对正常造血细胞无严重毒性，且与多种现有化疗药物有协同作用［1］，在最近HDAC抑制剂已经开始I/II期临床试验。丙戊酸钠(sodiumvalproate，VPA)是治疗癫痫的一种传统药物，毒副作用较小。最近发现，其在药理学水平有着HDAC抑制剂的特征性作用，可诱导肿瘤细胞分化与凋亡［2］。本试验以急性髓性白血病细胞HL-60为靶细胞，进一步探讨VPA对白血病细胞增殖、凋亡

6、和分化的影响。材料和方法试剂VPA由连云港制药厂生产，西京医院药剂科惠赠，纯度99.4%，分子式为C8H15NaO2，以去离子水配制成0.4mol/L浓度，过滤分装，贮存于-20℃。小牛血清购自民海生物工程有限公司。四氮唑蓝（MTT）、佛波酯（TPA）为Sigma公司产品。硝基蓝四氮唑（NBT）为华美生物工程公司产品。实验方法细胞培养急性髓性白血病细胞系HL-60来源于ATCC，由第四军医大学病理学教研室惠赠。细胞培养于含10%灭活小牛血清的RPMI1640培养液（含青霉素、链霉素各0.1U/L）中，置5%CO2饱和湿度

7、、37℃培养箱中悬浮培养，2-3天换液1次，实验用细胞处于对数生长期。MTT比色试验取对数生长期HL-60细胞接种于96孔板，每孔接种1500个细胞。根据预实验设VPA浓度为4、2、1和0.5mmol/L，在相同实验条件下，处理组中细胞分别加入不同浓度的VPA。每个浓度设4个平行孔，分别于加药后2、3、4、5、6天检测，于每次检测前4小时每孔加入MTT溶液（5mg/ml）20μl；37℃继续孵育4小时，然后终止培养，离心、弃上清，每孔加入150μlDMSO，充分溶解结晶物；而后选择492nm波长在酶联免疫检测仪上测定各孔

8、光吸收值，记录结果。试验重复3次，取平均值。以时间为横坐标，光吸收值（OD）为纵坐标，绘制生长曲线细胞形态学检查2mmol/LVPA处理HL-60细胞2天，0.25mmol/LVPA处理HL-60细胞1周后，分别收集细胞悬液，离心，PBS液洗涤，甩片，常规Coulter公司）检测凋亡百分比；2mmol/LVPA处理H