结核杆菌培养标准操作流程

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1、结核分支杆菌培养讲述内容：一、痰标本的采集二、结核分支杆菌培养操作规程结核分支杆菌培养是结核病诊断细菌学检验的重要内容之一（另外是“抗酸杆菌涂片检查法”）这里我只讲结核分支杆菌培养。讲之前我还是要强调下要保护好自己（即生物安全问题）。结核分支杆菌是怎样传播我想你们比我懂，由于时间关系，这里也不展开讲，进入正题………一、痰标本的采集1、痰标本的种类根据痰标本采集时间，可将标本分为3类：（1）即时痰：就诊时深呼吸后咳出的痰液；（2）清晨痰：患者晨起立即用清水漱口后咳出的第2口、第3口痰液；（3）夜间痰：送痰前一日患者晚间咳出的痰液。2、正确的咳痰方法：（1）咳嗽前

2、应缓慢的深吸气，吸气后稍屏气片刻。（2）躯干略向前倾，两侧手臂屈曲，平放在两侧胸壁下部，内收并稍加力。（3）咳嗽时腹肌用力快速收缩，使腹壁内陷。一次深吸气可连续咳嗽三声。（4）停止咳嗽并收缩将剩余的气体尽量呼尽。（5）在缓慢吸气或平静呼吸片刻，准备再次咳嗽的动作。（6）勿将漱口水、唾液、呕吐物、鼻咽分泌物等混入痰内，以免影响检验结果。如标本不合格，检验人员应当拒收，并和临床医生对接，重新采样。（7）标本量一般在3～5毫升。3、痰标本的保存和输送痰标本容器密封，勿倒置，严防痰液外溢。不能立即培养的痰标本，须置4℃冰箱保存，防止痰液干涸或污染。二、结核分支杆菌培养操作规

3、程培养基酸性改良罗氏（分离培养）——目前由州疾控统一购买按任务数配发并4℃冰箱保存。1、将培养基从冰箱取出，恢复到室温并在培养管上编培养序号，写上患者姓名、培养日期、痰涂片编号等信息。2、标本前处理：碱处理法取2mL痰标本于前处理管中加1-2倍痰标本量的4%NaOH，振荡器上震动30-60s后室温放置10-15min（不得超过20min）。3、接种方法：取前处理消化后痰液0.1mL,无菌操作接种于培养基斜面上，每份标本同时接种两支酸性改良罗氏培养基，放37℃孵育。4、结果与报告接种后3~7天观察，此后每周观察一次菌落生长情况，有菌落生长需经抗酸染色确认是否为分支杆菌

4、。若至第8周仍无菌落生长方可报告阴性结果。分支杆菌培养报告方式分支杆菌培养阴性：斜面无分支杆菌菌落生长分支杆菌培养阳性（1+）：菌落占斜面面积1/4分支杆菌培养阳性（2+）：菌落占斜面面积1/2分支杆菌培养阳性（3+）：菌落占斜面面3/4分支杆菌培养阳性（4+）菌落布满全斜面。5、培养基污染情况报告在观察分支杆菌生长情况时，发现有非分支杆菌生长，报告污染，重新送检。污染必须控制在2%以下，当污染率高于2%时，提示培养基污染或消化处理不当，应采取相应措施，查寻和分析原因。