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《应用荧光原位杂交技术检测宫颈脱落细胞的terc基因表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、应用荧光原位杂交技术检测宫颈脱落细胞的TERC基因表达莫耀禧莫伟英(通讯作者)陈春傅黄莉毛献宝黄悦悦张鹏(广丙壮族自治区人民医院生殖医学与遗产中心广丙南宁530021)【摘要】目的探讨应用FISH技术检测人类染色体端粒酶(TERC)基因表达及其在子宫颈病变的临床意义。方法釆用双色荧光原位杂交技术(FISH)以TERC/CSP3DNA探针检测TERC基因在83例宫颈脱落细胞中TERC基因拷贝数的变化,并结合病理诊断结果相比对分析。结果TERC基因在炎症/CINI、CINI1、CINIll和宫颈癌患者宫颈脱落细胞中表达率分别是3.4%、52.3%、71.4
2、%、和100%,TERC基因阳性率在炎症/CIN1级与CINII级、CIN111级及子宫颈癌中有显著性差异(P<0.05)。随着病变程度增加,TERC基因表达率增加，在炎症/CINI级与CINII级、CINIII级及子宫颈癌中TERC基因异常扩增细胞数的阳性率分别3.6%、6.2%、9.1%和17.8%。TERC基因异常扩增细胞数的阳性率炎症/CINI组明显低于CINII组、CINIII组和宫颈癌组(P<0.005)。TERC基因平均扩增拷贝数随着病变级别增高也在增加，在炎症/CINI组为2.04%、CINII组2.32%、CINIII组2
3、.91%和宫颈癌组3.24%,在炎症/CINI组与CINII组、CIN11I组和宫颈癌组以及CIN11组和CIN1I1组和宫颈癌组均有显著差异(P<0.05)。结论TERC基因参与宫颈癌的发生发展是一个重要的肿瘤标记物，应用FISH技术检测TERC基因的表达可作为监测宫颈病变进展有预测意义。【关键词】荧光原位杂交宫颈脱落细胞TERC基因细胞遗传学宫颈癌是最常见的妇科恶性生殖系统肿瘤之一。世界范围内，每年约有50万的宫颈癌新发病例，其中80%的病例来自于发展中国家［1,2］，近年来，发病率呈上升趋势且发病年龄趋于年轻化。早期诊断和治疗是改善患者预后
4、的关键。美国国立卫生研究院直接领导的针对子宫颈癌的研究表明,子宫颈细胞由非典型性发育异常向子宫颈癌转变的过程中几乎都伴有人类染色体末端酶(TERC基因图位于3q26.3)基因的扩增。目前，染色体3q上的TERC基因已被证明是重要的宫颈癌筛查的肿瘤标志物，对TERC基因检测成为宫颈癌诊断及预后的标记物及评估指标［3】。本研究建立焚光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization,FISH)技术以TERC/CSP3DNA探针对宫颈癌和各级宫颈上皮内瘤样变(cervicalintraepithelialneoplasia,CIN)组
5、织及其人类3号染色体的TERC基因进行了检测，探讨TERC基因与子宫颈癌发生、发展过程中的关系及其临床意义。1材料和方法1.1材料1.1.1临床资料收集2008年9月到2010年3月,广西壮族自治区人民医院妇科门诊83例治疗前患者的宫颈脱落细胞标本，所冇标本均经病理学诊断证实，并征得患者知情同意，患者年龄21〜72岁，平均37岁。1.1.2细胞标本采集用液基薄层细胞学宫颈刷插入宫颈U,在宫颈外U鱗柱状上皮交界处，以宫颈外口为中心，均匀旋转4〜6周，取出宫颈刷置于薄层细胞学检测液基(TCT)中备用。1.2方法1.2.1制片将宫颈刷在薄层细胞学检测液基(T
6、CT)内震荡洗氣取TCT液体与洁净离心管中，以1000r/min,离心lOmin。去上清，加入5mlKCI低渗溶液重新吹打悬浮细胞,37°C水浴20min。加入lml固定液(甲醇:冰乙酸3:1)离心；去上清，加入5ml固定液固定lOmin，离心后弃上清，如此反复2次；用沉淀的细胞制备成一定浓度的溶液，将细胞滴于玻片上制片。1.2.2FISH检测TERC基因方法探针:GLPTERC/CSP3DNA探针由北京金菩嘉医疗科技有限公司提供。TERCDNA探针杂交到3号染色体长臂(3q26.3),荧光信号为红色(四甲基罗丹明),CSP3DNA杂交到3号染色体着丝
7、粒(3pll.l〜qll.l),荧光信号为绿色,CSP3作为对照探针。1.2.3涂片预处理:涂片依次置于2×SSC(pH7.0)5min2次；O.lmol/mIHCLIOmin；0.01mol/mlHCL(40ml)和胃蛋白酶(50mg)混合液lOmin；室温下2×SSC10min;70%、85%和100%乙醇梯度脱水各2min，固定,自然干燥。1.2.4FISH操作步骤:避光环境中，配置探针混合液8μl杂交缓冲液、2μl探针；将探针混合液滴加于样本玻片的杂交区域，盖上盖玻片，封片。在杂交仪中温度74°C&plusm
8、n;l°C变性5min,42°C过夜杂交16h。第2天玻片洗脱：移去盖玻片,在温度45°C,玻
