用固相萃取和高效液相色谱法测定烟草中糖的研究. 

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时间:2018-10-29

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1、用固相萃取和高效液相色谱法测定烟草中糖的研究.摘要本文研究了用固相萃取和高效液相色谱法测定烟草中糖的方法。烟草中的糖用水超声震荡浸取;然后用WatersSep-pakC18相萃取小柱预分离,以WatersCarbohy-drate糖分析柱为固定相分离,75%乙腈为流动相分离,示差折光检测器检测测定。方法用于几种烟草样品中糖含量的测定,结果令人满意。关键词高效液相色谱法糖烟草1引言烟草中的水溶性糖主要有葡萄糖、果糖、蔗糖、半乳糖和麦芽糖等,它们是影响烟草吸味的最重要化学成分之一[1,2],目前烟草中

2、的糖的测定方法主要有氧化还原滴定法,分光光度法,连续流动分析和高效液相色谱法等[3]。但是氧化还原滴定法和分光光度法只能测糖的总量。液相色谱法是较可靠的糖测定方法,我们曾研究过用WatersSugar-Pak-1糖分析柱测定烟草中的糖,但蔗糖和麦芽糖不能完全分离[4]。本实验研究了用WatersCarbo-hydrate糖分析柱分离测定了烟草样品中的葡萄糖、果糖、蔗糖、半乳糖和麦芽糖,五种糖均能达到基线分离。并建立了用水超声浸取,相萃取预分离的样品前处理方法,获得了满意结果。2实验部分2.1主要仪

3、器和试剂美国安捷伦公司高效液相色谱仪HP1100四元泵,HP1100自动进样器,HP1100示差折光检测器和色谱工作站;色谱纯乙腈;蔗糖、麦芽糖、半乳糖、葡萄糖、果糖标准。2.2色谱条件色谱柱:WatersCarbohydrate色谱柱;流动相为75%乙腈,流速为1.5ml/min;柱温35°C;进样量20n1_。2.3样品处理准确称取烟草样品约0.500克,用50«11_水在40-50°(3下超声萃取30[114,过滤,弃去最初的约10mL滤液,收集后面的滤液。取5mL通过预活化好的Sep-Pa

4、kC18固相萃取小柱,弃去最初的2mL,收集后面的3mL用4.5

5、im滤膜过滤,取20nL进样分析;在该条件下,标样和烟草样品的色谱图见图-1。3结果与讨论3.1检测器的选择由于待测定物在紫外光区无吸收,而且待测物在样品中的含量较高,故选用示差折光检测器检测。3.2流动相和柱温的选择WatersCarbohydrate钙型阳离子交换柱为分离糖和多羟基化合物专用柱,该柱用75%的乙腈水溶液作流动相,柱温要求控制在它之间,实验选用柱温为35°C。3.3样品前处理烟草样品中的糖一般按文献[3]的方法用8

6、0%乙醇提取,该方法需用醋酸铅沉淀单宁,蛋白质等干扰物,过量的铅还需用草酸钾除去,操作麻烦。我们试验了新的样品前处理方法,由于待测的几种糖都易溶于水,所以实验选用水为提取剂。试验了振荡浸取和超声浸取对糖提取率的影响,在相同时间内超声浸取溶出率明显高于振荡浸取,故实验选用超声浸取,室温下糖溶出慢,升高温度可加速糖的溶出,但温度过高会加快蔗糖和麦芽糖水解,使蔗糖和麦芽糖回收率偏低,且葡萄糖,果糖回收率偏高;故实验选择浸取温度为40〜50°C,在该温度下超声浸取25min以上可使糖完全溶出,故实验选用超

7、声浸取3Omin。糖提取液应在最好当天测定,如放置过夜会因多糖水解导致葡萄糖测定结果稍有偏高。烟草样品提取液中除了糖外,还含有少量其它成分,如单宁、多酚、蛋白质、油脂等。这些物质易腐蚀色谱柱且影响分离,所以在进样之前要预分离这些成分。我们采用Sep-PakCW固相萃取小柱预分离单宁、多酚、蛋白质、油脂等成分。用WatersSPE真空提取装置,每次可同时处理20个样,小柱活化和样品富集的流速均为10ml/min,小柱用5mI乙醇浸润,再用10ml水洗去乙醇,样品以10ml/min的流速通过小柱,弃去

8、最初的2ml,收集后面的3ml用4.5nm滤膜过滤,取20uI进样分析,这样可有效地除去单宁、多酚、蛋白质、油脂等水难溶成分和颗粒成分。3.4回归方程、相关系数及检测限分别配制浓度约为5mg/mI,Img/ml,0.2mg/ml,0.04mg/ml的标准溶液,进样后计算出不同浓度的峰面积,计算出回归方程。回归方程为见表1。根表1回归方程、相关系数及检测限组分据信燥比S/N=3,测得个组分最低检测浓度,结果见表1。表2方法精密度及回收率2.5回收率实验及精密度取烟草样品按本文2.3处理,在相同色谱条

9、件下测定5,结果见表22.6样品分析及结果用本方法测定了六种烟草样品中的糖,各糖回收率在98-102%之间,相对标准偏差在0.55_0.82%之间。结果令人满意。4结论本方法用WatersCarbohydrate色谱柱高效液相色谱法测定烟草样品中的糖,并用水超声浸取提取样品中的糖,方法简便快速,结果可靠,样品可实现批量处理,可满足大量样品分析的要求,提高了工作效率。参考文献:1金闻博,戴亚编著.烟草化学.XX:清华大学出版社,1993,122李汉超,王淑娴.烟草、烟气化学及分析.郑

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