hplc法同时测定丹参类药材中水溶性活性成分的含量

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1、HPLC法同时测定丹参类药材中水溶性活性成分的含量杨树声,宋平顺，赵建邦，丁永辉【摘要】目的建立HPLC法同时测定丹参和甘肃丹参中丹参素钠、原儿茶醛和丹酚酸B含量的方法，通过3种水溶性活性成分测定，评价野生和甘肃栽培丹参、野生和栽培甘肃丹参的质量。方法色谱柱为C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为甲醇—冰醋酸—水（20∶80∶1）；流速1.0mL/min。二元梯度洗脱。结果丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B分别在58～1455ng、15～162ng、825～8250ng范围内线性关系良好，回收率分别为10

2、2.20%、101.53%和103.03%。结论方法简便、准确、分离效果好，可作为丹参水溶性活性3种成分的同时定量测定方法。【关键词】高效液相色谱法；丹参；甘肃丹参；水溶性成分；丹参素钠；原儿茶醛；丹酚酸B；栽培；野生丹参《中国药典》收载为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge的根[1]，甘肃分布于天水、陇南地区，仅有资源而无商品，近年，庆阳、平凉等地人工栽培成功。甘肃丹参来源于唇形科植物甘西鼠尾草Salviaprze.或变种褐毛甘西鼠尾草Salviaprzeandarinonum(Diels)St

3、ib.的干燥根及根茎，分布于甘肃、四川、云南等省区，为中药丹参的地方习用品，在甘肃药用历史较久，清代地方志已有收录[2]，亦在定西、平凉等地种植成功。甘肃人工栽培的丹参、甘肃丹参的质量研究评价未见报道，笔者建立了HPLC法同时测定丹参中丹参素钠、原儿茶醛和丹酚酸B含量的方法，通过3种水溶性活性成分测定，评价野生和甘肃栽培丹参、野生和栽培甘肃丹参的质量，为今后甘肃发展人工资源和选择GAP适宜的基地提供依据。1仪器与试药1.1仪器美国iltiorrhizaBge的根，栽培样品产于华亭县和市售1，野生品为市售2；以上经作者

4、严格鉴定。2方法与结果2.1色谱条件大连伊利特C18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）。流动相为甲醇—冰醋酸—水（20∶80∶1），二元梯度洗脱，0～5min，甲醇10%；5～25min，甲醇10%～35%；25～45min，甲醇35%。流速1.0mL/min；检测波长280nm。进样量10μL。柱温45℃。理论板数按原儿茶醛峰计算应不低于2000。2.2含量测定2.2.1对照品溶液的制备精密称取丹参素钠5.82mg、原儿茶醛3.67mg、丹酚酸B8.25mg对照品，分别置于10mL量瓶中，加甲醇定溶制成对照品

5、储备溶液。2.2.2供试品溶液的制备取样品（过3号筛）0.5g，精密称定，置50mL容量瓶中，精密加水50mL，称定重量，超声处理（功率250in，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。对照品溶液、供试品溶液的HPLC色谱图见图1、图2。图1对照品HPLC图1.丹参素钠2.原儿茶醛3.丹酚酸B图2供试品HPLC图2.2.3线性关系考察分别精密称取1mL丹参素钠、1mL原儿茶醛、1mL丹酚酸B对照品储备溶液，分别置于100mL、250mL和5mL棕色量瓶中，加甲醇稀释定容至刻度，摇匀。分别选

6、择1,5,10,15,25μL和1,3,5,7,11μL以及5,10,20,40,50μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，以进样量（X）为横坐标，以峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，其线性方程分别为：X=1.8208×10-3Y-0.1124、ｒ=0.9999；X=1.9078×10-4Y-0.0171、ｒ=0.9991；X=1.0745×10-6Y-1.8053、ｒ=0.9998；结果分别在58～1455ng、15～162ng和825～8250ng范围内线性关系良好。2.2.4精密度试验对同一批甘肃丹参样品（临夏）

7、按“供试品溶液制备”方法，精密吸取10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，重复进样5次，结果峰面积RSD分别为1.85%、1.27%和1.01%。2.2.5稳定性试验对同一批甘肃丹参样品（临夏）按“供试品溶液制备”方法，分别于配后0，2，4，6，8h，精密吸取10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。结果表明，丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B在12h内基本稳定，RSD分别为2.56%、2.76%和2.14%。2.2.6重复性试验对同一批甘肃丹参样品（临夏）按“供试品溶液制备”方法，取5份制备，精密吸取10μL，注入液相色谱仪，

8、测定丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B的含量，分别为0.0513%、0.0150%和3.5001%，RSD分别为2.57%、2.70%和2.18%。2.2.7回收率试验取已知含量的同批样品0.25g（产临夏，丹参素钠、原儿茶醛的含量分别为0.0513%、0.0150%、3.5001%）6份，精密称量，分别精密加入对照品储备溶液3mL丹参素钠（0.04