苯酚硫酸法测定鲜人参中多糖含量

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1、苯酚硫酸法测定鲜人参中多糖含量钟岩潘浦群王艳红初丽伟【摘要】　　目的建立了测定鲜人参中多糖含量的分析方法。方法用苯酚硫酸法，在波长490nm处测定吸光度，人参多糖在10～160μg范围内具有良好的线性关系，相关系数为0.9987。平均回收率为98.40%，RSD=2.53%。结果人参多糖的最佳提取条件为：料液比为1∶10，提取温度为100℃，提取时间为4h，人参多糖换算因子为1.58，鲜人参中多糖的含量为18.14g/100g。结论该方法简便、准确率高、重现性好。【关键词】鲜人参多糖苯酚硫酸法含量　　Abstract：ObjectiveToestablishedana

2、nalysismethodforthedeterminationofthecontentofpolysaccharidesfromfreshrootofPanaxginseng.MethodsThemethodofphenolvitriol.Theabsorbencyrate.ResultsThereumextractionconditionofGinsengpolysaccharidesethodissimple,accurateandrepeatable.　　Key处和一定浓度范围内，吸光度与糖浓度呈线性关系，采用比色法对鲜人参多糖含量进行测定。　　1材料与方法　

3、　1.1材料与仪器　　鲜人参；无水乙醇（AR）；95%乙醇（AR）；硫酸（AR）；苯酚（AR）；葡萄糖（AR）。植物粉碎机，电子天平，DU-7500紫外分光光度计（美国Backman公司），离心机，真空干燥器，恒温水浴，真空冷冻干燥机等。　　1.2鲜人参多糖的提取与精制新鲜的鲜人参，植物粉碎机粉碎后，称取适量样品，按浸提比1∶20，在100℃水浴中提取4h，趁热用布氏漏斗抽滤，浓缩，加3倍体积95%乙醇醇沉，置冰箱24h，离心20min（5000r/min），沉淀用适量95%乙醇洗涤两遍，真空冷冻干燥，得人参粗多糖。　　称取一定量人参粗多糖，制成粗多糖质量分数为1%的溶

4、液，采用Sevage法除蛋白，量取水浸浓缩液的体积为V(ml)，向其加入1/5V的氯仿和1/25V的正丁醇，振荡20min，3000r/min的转速下，离心15min，合并上清液测其体积，继续加相应体积的氯仿和正丁醇，并重复上述操作，直至氯仿层与正丁醇层之间无白色沉淀。　　将水浸浓缩液倒入下端扎好的截流分子量为6000～8000的半透膜袋中，将袋的另一端用绳扎好后，悬挂在盛有水的烧杯里，将烧杯放在磁力搅拌器上，开动搅拌，蒸馏水透析48h，期间每2h更换一次水，经常更换清水使透析膜内溶液的浓度差加大，并加以搅拌，加快透析速度，除去无机盐、单糖、双糖等小分子杂质。加3倍体积

5、95%乙醇醇沉。沉淀放入真空冷冻干燥机内，冷冻干燥48h，获得白色固体粉末，干燥即得精制人参多糖。　　1.2.1样品溶液的制备　　精密称取适量样品，分别置具塞三角瓶中，按一定料液比、浸提温度、浸提时间，在热水浴中浸提4h，用布氏漏斗抽滤，浓缩，浓缩后加3倍体积95%乙醇溶液，静置24h后，离心，沉淀用蒸馏水溶解，定容至250ml，即为待测样液。　　1.2.2标准曲线的制备　　精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品1g，置于100ml容量瓶中，溶解并稀释至刻度，配成10mg/ml的标准贮备液，吸上述贮备液1ml定容至100ml，配成0.1mg/ml的工作液。精密移取葡萄

6、糖标准液0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6ml于25ml具塞刻度试管中，加蒸馏水至2.0ml，再各加5%苯酚溶液1.0ml摇匀，迅速加入浓H2SO4溶液5ml，振摇5min，放置10min，置沸水浴中加热20min，取出冷却至室温，于490nm，以试剂空白为参比测定吸光度。　　1.2.3换算因子的测定精密称取干燥至恒重的精致人参多糖5.0mg〔6,7〕，加蒸馏水溶解，转移至25ml容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀得人参多糖储备液；吸取多糖储备液2.0ml，置于10ml容量瓶中，加水定容；吸取上述溶液2.0ml，按标准曲线的绘制方法测定

7、吸光度，同时做空白对照；由回归方程求出此人参多糖储备液中葡萄糖的浓度，并计算其中葡萄糖含量。按下式计算换算因子f：f=m/(c×D×V)，式中m为人参多糖的质量（mg），c为人参多糖储备液中葡萄糖浓度（mg/L），D为人参多糖的稀释倍数，V为体积（ml），测得f=1.58(n=7)。　　1.2.4回收率的测定精密称取适量的样品加入标准葡萄糖溶液（10mg/ml），按照上述方法同时做3个重复，分别测其吸光度，根据葡萄糖的检出量，计算其回收率，结果见表1。　　回收率（%）=实验测值-样品所含被测成分量/加入纯品量×100%　　1.2.5多糖含