资源描述：
《实验室常用技术参数资料》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、杂交试验中用于降低背景的封闭剂试剂用途Denhardt试剂Northern杂交使用RNA探针的杂交单拷贝序列的Southern杂交将DNA固定于尼龙膜上的杂交Denhardt试剂通常配制50×贮存液，过滤后保存于-20℃。可将该贮存液10倍稀释于预杂交液（常为含有0.5%SDS和100μg/ml经变性被打断的鲑精DNA的6×SSC或6×SSPE）中。50×Denhardt液中含5g聚蔗糖（Ficoll,400型，Pharmacia）、5g聚乙烯吡咯烷酮和5g牛血清白蛋白（组分V”Sigmal），加水至终体积为500ml。BLOTTOGrunstein-Hogness杂交Be
2、nton-Davis杂交除单拷贝序列Southern杂交以外的所有Southern杂交斑点印迹1×BLOTT（牛乳转移技术优化液，BovineLactoTransferTechniqueOptimizer）,是含5%胶脂奶粉和0.02%叠氮钠的水溶液，应保存于4℃。使用前可用预杂交液稀释25倍。BLOTTO不应与高浓度的SDS并用，因为后者会导致牛奶中蛋白质析出。如果杂交背景不合要求，可在杂交液中加入NP-40至终浓度为1%。BLOTTO不能用作Northern杂交的封闭剂，因为这一封闭剂中可能含有RNA酶，其活性之高使人无法接受。注意：叠氮钠有毒性，取用时需戴手套小心操作
3、。含叠氮钠的溶液应予明确标记。肝素Southern杂交原位杂交肝素（SigmaH-7005，从猪中提取的二级产品或相当等级的产品）用4×SSPE或4×SSC溶解配制成50mg/ml的浓度，保存于4℃。肝素在含有葡聚糖硫酸酯的杂交液中用作封闭剂的浓度为500μg/ml，在不含葡聚糖硫酸酯的杂交液中的浓度为50μg/ml。经变性并被打断的鲑精DNAsouthern和Northern杂交把鲑鱼精子DNA（Sigma,Ⅲ,盐钠）溶解于水配制成10mg/ml的浓度，必要时于室温磁力搅拌2～4h助溶。把溶液中NaCl的浓度调至0.1mol/L，并用酚和酚/氯仿各抽提一次，回收水相。合D
4、NA溶液快速通17号皮下注射针头12次，以剪切DNA。加入2倍体积用冰预冷的乙醇沉淀DNA。离心回收DNA并重溶于水，配制成10mg/ml的浓度，测定溶液的OD260值并计算出精确的DNA浓度，然后煮沸10min，分装成小份保存于-20℃。使用前置沸水浴中加热5min，然后迅速在冰浴中骤冷。预杂交液中应含有100μg/ml经变性并被打断的鲑鱼精子DNA 六、常用凝胶的技术参数 1．葡聚糖凝胶的某些技术数据种类干颗粒直径（μ）分子量分级范围床体积毫升/克干分子筛得水值溶胀最少平衡时间（h）柱头压力（kPa）(2.5cm直径柱)肽及球形蛋白质葡聚糖（线性分子）室温沸水浴Se
5、phadexG-1040～120～700～7002～31.0±0.131 SephadexG-1040～120～150015002.5～3.51.5±3.531 SephadexG-25 粗级100～300 (≈5～100目) 中级50～150 (≈100～200目)1,000～5,000100～5,0004～61.5±0.262细级20～800(≈200～400目) 超细10～40 SephadexG-50 粗级100～200 中级50～1501,500～500～ 细级20～8030,
6、00010,0009～115.0±0.362超细10～40 SephadexG-75 40～1203,000～1,000～ 超细10～4070,000950,00012～157.5±0.52433.92～15.86SephadexG-100 40～1204,000～1,000～ 超细10～401,500,000150,00015～2010.0±1.04852.35～9.41SephadexG-150 40～1205,000～1,000～20～30 超细10～40400,000150,00018
7、～2215.0±1.57250.88～3.53SephadexG-200 40～1205000～1000～30～40 10～40800,000200,00020～2520.0±2.07250.39～1.572.聚丙烯酰胺凝胶的技术数据型号排阻的下限(分子量)分级分离范围(分子量)膨胀后的床体积(ml/g干凝胶)膨胀所需最少时间(室温,h)Bio-gel-P-21,600200～2,0003.82～4Bio-gel-P-43,600500～4,0005.82～4Bio-gel-P-64,600
