凋亡抑制蛋白survivin在骨肉瘤中的表达及其

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1、凋亡抑制蛋白Survivin在骨肉瘤中的表达及其【摘要】　　［目的］探讨Survivin基因的表达在骨肉瘤发生、发展中的作用及其与PTEN、cyclinD1蛋白表达的相互关系。［方法］应用免疫组化（SP）法检测40例骨肉瘤组织、20例骨软骨瘤组织中Survivin、PTEN、cyclinD1蛋白的表达情况以及Survivin与PTEN、cyclinD1蛋白两者之间的相关性。［结果］Survivin在骨肉瘤中的阳性率为62.5%（25／40），明显高于对照组骨软骨瘤10.0%（2／20）的阳性率（P＜0.0

2、1）。PTEN蛋白在骨肉瘤中的阳性表达率为52.5%（21／40），而在骨软骨瘤中为95.0%（19／20），两者相比有显著差异（P＜0.01）。cyclinD1蛋白在骨肉瘤中的阳性率为80.0%（32／40），高于在骨软骨瘤中的45.0%（9／20），有统计学意义（P＜0.05）。Survivin和PTEN两者表达强度之间呈显著负相关（P＜0.01），而Survivin与cyclinD1表达呈正相关（P＜0.01）。［结论］Survivin在骨肉瘤组织中过表达与骨肉瘤的发生有关；PTEN在骨肉瘤组织中失

3、表达，它可能下调Survivin表达，对骨肉瘤起抑制作用：Survivin和cyclinD1在骨肉瘤的发生发展中可能起协同作用。【关键词】骨肉瘤Survivin　PTENcyclinD1免疫组织化学　　ExpressionofSurvivininHumanosteosaraanditscorrelationmonohistochemicalmethod（SPmethod）atissues.［Result］TheexpressionrateofSurvivina（10.0%）（P＜0.01）.Theexpr

4、essionofPTENa（95.0%）thanthatinosteosara（52.5%）（P＜0.01）.ThepositiveexpressionrateofcyclinD1a（45.0%）.ThereaandPTENcandoayplayanpromotingroleandPTENmayplayanprotectiveroleinthedevelopmentofosteosara.SurvivinamdcyclinD1mightplaysynergetierolesintheprocessofos

5、teosara.　　Keymunohistochemistry　　骨肉瘤是最常见的骨原发性恶性肿瘤，好发于青少年，对化疗和放疗敏感性较低，预后差，易复发和转移，5年生存率低。目前，在骨肉瘤的诊断和治疗方面尚缺乏有效的指标及方法。　　Survivin是近年来发现的一种细胞凋亡抑制蛋白家族成员，除具有较强的抑制细胞凋亡作用外，还有调节细胞周期和肿瘤血管保护等多种生物学特性。它选择性表达于多种常见的恶性肿瘤，而在癌旁正常组织和成人分化组织中不表达。PTEN是人类发现的第1个具有酪氨酸磷酸酶作用的抑癌基因，在调控

6、细胞生长以及凋亡过程中也发挥着重要的作用。本文利用免疫组化技术检测Survivin、PTEN和cyclinD1蛋白在骨肉瘤中的表达，初步探讨Survivin在骨肉瘤发病机理中的作用以及其与PTEN、cyclinD1相互间的关系。　　1材料与方法　　1.1标本　　所以病例均为收集青岛大学医学院附属医院骨科2001年1月～2005年6月手术切除标本。其中骨肉瘤标本40例，术前均未行放疗及化疗。男28例，女12例;平均年龄19.6岁（9～60岁），所有标本均经病理证实。根据Enneking外科分期，Ⅰ级8例，Ⅱ

7、级21例，Ⅲ级11例；组织学分型中骨母细胞型16例，纤维母细胞型13例，软骨母细胞型7例，其他类型（血管扩张型、混合型）4例。每例骨肉瘤病例均经临床、影像学和病理三者结合确诊。选取同期骨软骨瘤标本20例作为对照。所有组织标本均来自本院病理科存档石蜡块，经10%甲醛固定，常规石蜡包埋，3μm厚连续切片。　　1.2试剂与方法　　采用免疫组织化学染色法（SP法）。一抗Survivin兔抗人单克隆抗体、PTEN鼠抗人单克隆抗体及cyclinD1鼠抗人单克隆抗体以及SP试剂盒均为北京中杉金桥生物技术公司产品；一抗工

8、作浓度均为1∶50。实验步骤严格按试剂盒说明书进行。石蜡切片脱蜡至水，3%过氧化氢室温孵育10min〔1〕，以微波枸橼酸盐进行抗原修复，正常羊血清封闭20min，DAB显色，苏木精复染，脱水，透明封片，中性树胶封固。用已知阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗，作为阴性对照。　　1.3结果判定标准　　参照Fromoan等级相关进行统计学分析。　　2结果　　2.1Survivin、PTEN和cyclinD1在骨肉瘤、骨软骨瘤中的