wortmannin对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤的

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1、wortmannin对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤的【摘要】目的：观察磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂annin对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肺损伤的保护作用并探讨其机制.方法：将健康成年SD大鼠54只随机分为对照组、SAP组和SAP＋annin组，每组18只，逆行胆胰管注射50g/L牛磺胆酸钠制备SAP模型.检测血清TNFα水平、肺组织湿/干质量比值、肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性、支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量；观察肺组织及胰腺组织的病理变化.结果：SAP组较对照组血清TNFα水平、肺组织湿/干质量比值、BALF蛋白含量及肺组织MPO活性

2、均显著升高（P<0.01），胰腺、肺组织病理损伤随病情进展而逐渐加重；SAP＋annin组较对照组各项指标均升高，但较SAP组均明显降低（P<0.01），胰腺、肺组织病理损伤较SAP组减轻.结论：annin对SAP大鼠肺损伤有一定的保护作用，其机制可能与其抑制了中性粒细胞内PI3K信号转导通路的活化，使多种炎症细胞的活化和TNFα等炎症因子的释放受到抑制有关.【关键词】重症急性胰腺炎annin中性粒细胞磷脂酰肌醇3激酶肺/损伤　　0引言　　重症急性胰腺炎（severeacutepancreatitis,SAP）占急性胰腺炎病例的10％～25

3、％，病死率高达20%～30%，除导致胰腺病变外，肺是最早受累的器官之一，从低氧血症到急性呼吸窘迫综合症［1］（ARDS）均可出现，其发生机制是由于胰腺腺泡细胞受损后血管内皮细胞、淋巴细胞、中性粒细胞、巨噬细胞等活化，释放大量的化学因子和细胞因子，造成肺毛细血管和肺泡上皮细胞损害［2］.annin是磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）信号转导通路的抑制剂，可抑制中性粒细胞的募集和活化，从而减少炎症因子的释放，annin能否减轻SAP过程中的肺损伤，目前文献报道甚少.我们通过annin对大鼠的预处理，来观察其对SAP时肺损伤的保护作用.　　1材料和方法　　1.1材

4、料　　annin（Sigma公司）；牛磺胆酸钠（Sigma公司），溶于9mL/L生理盐水，终浓度50g/L；大鼠TNFαELISA试剂盒（晶美生物工程公司）；雌性SD大鼠54只（第四军医大学实验动物中心），体质量220～270g.UV7504型紫外可见分光光度计（上海精密仪器仪表有限公司）.　　1.2方法　　1.2.1动物分组　　将SD大鼠随机分为3组：对照组、SAP组和SAP＋annin组，每组18只，每组又分为术后3，6，12h组，每组6只.　　1.2.2模型建立　　大鼠术前12h禁食，自由饮水.用10g/L戊巴比妥钠以30mg/kg腹腔注射.取

5、上腹部正中切口，显露胰腺，确认胆胰管，动脉夹夹闭其远端（靠近十二指肠）、近端（左右肝管汇合处）；SAP组用1mL注射器针穿刺贴近胆胰管十二指肠开口处胆管，以0.2mL/L的速度匀速逆行注入50g/L牛磺胆酸钠（0.8mL/kg），注射完毕后动脉夹继续夹闭胆胰管3～4min，以使牛磺胆酸钠充分进入胰腺，关腹.对照组给予等量生理盐水注入，SAP＋annin组于建模前给予annin1.4mg/kg，ip［3］，对照组和SAP组给予等量对应溶剂.　　1.2.3标本收集　　分别于建模后3，6，12h每组处死6只大鼠，门静脉取血，观察胰腺大体病理改变，并留取胰腺组织

6、，40mL/L多聚甲醛固定，待病理切片；解剖胸腔暴露肺，观察肺大体病理改变.做右侧肺支气管肺泡灌洗，灌洗液收集后待测蛋白含量；取小块左下肺组织，迅速置入冻存管-80℃冻存，待测MPO活性；另取一小块左下肺叶组织，40mL/L多聚甲醛液固定，待病理切片检查.　　1.2.4血清TNFα含量测定　　门静脉取血，置室温下1h，待样本完全凝固后以2500r/min速度离心15min，吸取上清，严格按照ELISA试剂盒说明测定3，6，12h血清TNFα含量.　　1.2.5肺组织湿/干质量（PO活性检测　　取左肺组织约100mg，加5g/L溴化十六烷基三甲胺（HTA

7、B）1mL制备匀浆，反复冻融3次并超声粉碎(10s，3次)，4℃，3000r/min离心30min，取上清0.1mL加入邻联二茴香胺缓冲液2.9mL，保持温度于25℃，立即在分光光度计460nm波长下进行2min的扫描，记录第30s和第90s的吸光度差值，以此1min内吸光度的变化代表酶活力的改变，MPO活力单位(U/g)=(ΔA460nm/min)/11.3×(g/L).其中，g为所加组织量，L为反应液.　　1.2.8病理形态学观察　　对胰腺组织、肺组织常规石蜡包埋，4μm切片，HE染色后于光学显微镜下观察病理改变.　　统计学处理:使用SPSS统计软件

8、进行数据分析，所有实验结果以x±s表示，各组血清TNFα,肺PO活性比较行t检