淤血肠神经组织map2、cad和s100表达及意

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1、淤血肠神经组织MAP2、CAD和S100表达及意【摘要】　　目的建立兔肠淤血模型,观察微管相关蛋白(MAP2)、S100蛋白(S100)与组织蛋白酶D(CAD)在肠淤血模型肠神经组织中的表达,探讨其在肠淤血发生、发展中的作用。方法利用夹闭门静脉的方法制作肠淤血动物模型,应用免疫组织化学的方法观察正常组、对照组、实验组中小肠壁肠神经组织中MAP2、S100、CAD的表达情况。结果实验组MAP2、S100的表达高于正常组及对照组；CAD的表达低于正常组及对照组,差别有统计学意义(t=2.256～5.542,P<0.05、0.01)。结论肠淤血

2、状态导致的肠缺血、低氧以及代谢产物和毒素的堆积，可导致肠道神经元数量减少；肠淤血造成的缺血、低氧状态也激发了神经纤维的再生。【关键词】肠淤血微管相关蛋白质类S100蛋白质类组织蛋白酶D兔　　［ABSTRACT］ObjectiveTostudytheexpressionofMAP2,S100andCADinnervetissueofacongestiveintestinemodelanddiscusstheirimpactonitsdevelopment.MethodsThemodeladebyclampingtheportalvein,theexpres

3、sionofMAP2,S100andCADinnervetissueofsmallintestineodel,normalcontrolandexperimentalgroupmunohistochemistrytechnique.ResultsIntheexperimental,theexpressionofMAP2andS100algroups,iaofintestine,hypoxia,andaccumulationofmetabolicproductandtoxin,leadingtodecreaseofamountofneuronand,

4、ontheotherhand,intestinalcongestionstimulatesregenerationofnevefibers.　　［KEYicrotubuleassociatedproteins;S100proteins;CathepsinD;Rabbits　　胃肠运动主要受两方面因素的调节:一是神经系统，二是体液因素[1]。胃肠道运动功能（如小肠的分节运动以及蠕动）主要受局部的肠神经系统调节，而对中枢神经系统具有相对独立性。肠神经系统的缺乏或功能异常，则导致胃肠道功能紊乱[2]。有证据显示，在肠道感染状态下，肠神经元可表现为神经元数目和神经

5、元内化学递质的改变、神经元兴奋性的增加等[3]。而肠淤血是众多肠道疾病共有的病理学改变，可造成肠道运动功能、肠道微循环、肠黏膜屏障等方面的损害[4]。本实验应用免疫组织化学的方法，观察肠神经组织中微管相关蛋白（MAP2）、组织蛋白酶D（CAD）和S100蛋白（S100）表达的变化，以期阐明肠淤血状态下肠神经元的改变，为临床相关疾病的诊断、治疗提供依据。　　1材料和方法　　1.1实验材料　　健康纯种新西兰大白兔30只，随机分为实验组、对照组及正常组，每组10只。采用100g/L水合氯醛（0.3mL/100g体质量）腹腔注射麻醉。依次切开皮肤、皮下、腹膜，

6、暴露门静脉，以显微手术用无损伤动脉夹夹闭门静脉入肝处。无菌生理盐水纱布覆盖切口，旁照灯照射保暖。1h后松开动脉夹恢复血流，依次关闭切口。对照组进行同样操作但不夹闭门静脉。正常组不作任何处理。12h后处死动物，取距胃幽门部15cm处小肠组织1cm×1cm。　　1.2免疫组化染色　　标本经40g/L甲醛溶液固定，石蜡包埋，连续切片，切片厚度为4μm。行MAP2、CAD、S100免疫组化染色。鼠抗兔微管蛋白抗体、鼠抗兔CAD抗体、鼠抗兔S100抗体、羊抗兔二抗免疫组化试剂盒及DAB显色剂均购自武汉博士德生物工程有限公司。观察正常组、对照组及实验组肠壁中神经节

7、细胞、神经胶质细胞及神经纤维的染色结果。　　1.3统计学处理　　用SamplPCI图像分析系统进行半定量分析，对所得数据进行t检验。　　2结果　　2.1MAP2免疫组化染色　　各组中均可见阳性细胞，但正常组阳性细胞染色相对较浅；对照组和正常组差别不大；实验组可见大量染色阳性细胞。用SamplPCI图像分析系统对免疫阳性细胞进行半定量分析，正常组平均吸光度值为0.069±0.027，对照组为0.075±0.064，实验组为0.158±0.043，实验组平均吸光度值高于对照组和正常组，差异均有显著性(t=3.404、5.542,P<0.01)。　　2

8、.2S100免疫组化染色　　在正常组中可见到在阳性