降钙素基因相关肽对大鼠急性肺损伤的治疗作用及其可

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1、降钙素基因相关肽对大鼠急性肺损伤的治疗作用及其可【摘要】目的研究降钙素基因相关肽(CGRP)对大鼠急性肺损伤(ALI)的治疗作用及其可能机制。方法将24只SD大鼠随机分为3组，生理盐水对照组、内毒素(ETX)模型组、CGRP治疗组。通过颈外静脉插管给药，给药后4h处死动物，收集大鼠动脉血及肺泡灌洗液(BALF)，测定动脉血氧分压(PaO2)及BALF总磷脂含量(TPL)、表面张力、乳酸脱氢酶(LDH)活性、总蛋白(TP)含量、碱性磷酸酶(AKP)活性。结果与对照组比较，给予ETX后大鼠动脉血PaO2下降，BALF中AKP、LDH活性升高、TP含量升高、表面张力升高、TPL含量下降，C

2、GRP可明显改善ETX引起的上述指标的变化。结论CGRP能明显减轻ETX引起的急性肺损伤，其机制可能与CGRP减轻AT-Ⅱ的损伤，促进PS的合成分泌有关。【关键词】降钙素基因相关肽;肺泡Ⅱ上皮细胞;急性肺损伤　　【Abstract】ObjectiveTostudytheprotectedeffectofcalcitoningene-relatedpeptide(CGRP)onalveolartypeIIcells(AT-Ⅱ)fromacutelunginjury(ALI)inducedbyendotoxin(ETX).Methods24ratsjugular;ETXgroupjugu

3、lar;CGRPgroupjugular.Afterfourhours,theratseasured,andpartialpressureofoxygen(PaO2)inarterialbloodinjurybyETX.OneofthepossiblemechanismsisthatCGRPcanprotecttheAT-Ⅱandfacilitatethesynthesizingandsecretingofpulmonarysurfactants(PS).　　【Keya公司；碱性磷酸酶(AKP)、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品；725-C型分光光度计为上海第

4、二分析仪器厂生产；IBL500血气分析仪由Radiometer公司生产。　　1.2方法　　1.2.1实验分组及模型复制将大鼠随机分为3组：对照组(n=8)，经大鼠颈外静脉插管注射等容积生理盐水;ETX组(n=8)，经大鼠颈外静脉插管注射ETX2mg/kg复制ALI模型，注射ETX后再立即注射与CGRP等容积的生理盐水；CGRP组(n=8)，经大鼠颈外静脉插管注射ETX2mg/kg后立即注射CGRP1.5μg/kg。　　1.2.2手术及标本采集大鼠腹腔注射乌拉坦5ml/kg,麻醉满意后固定于鼠板，颈部正中切口切开皮肤,分离左侧颈静脉,插入塑料导管，按分组标准给药。给药后4h，先经左颈动

5、脉插管取血0.5ml，然后行颈椎脱臼处死大鼠，行气管切开插管术，以生理盐水（20ml/kg体重）进行支气管肺泡灌洗，连续行3次，取第１次灌洗所得的肺泡灌洗液(BALF)0.2ml行BALF表面张力的测定，收集所有BALF，离心（3000r/min）10min，弃沉淀，取上清，留1.2ml用于测AKP、LDH、总蛋白(TP)等，剩余上清用于磷脂提取并定量。　　1.2.3表面张力的测定用毛细管法测定BALF表面张力［3］,将毛细玻璃管垂直地插入到BALF中,精确测量管内外液面的高度差,根据拉普拉斯方程σ=rρg(ｈ+ｒ/3)/2计算BALF的表面张力。其中,σ表示表面张力(单位为Ｎ/ｃｍ

6、),ｒ表示毛细管半径,ρ表示液体密度,ｇ表示重力加速度,ｈ表示内外液面高度差。　　1.2.4总磷脂(TPL)的测定采用Bartlett法［4］（略有改良）测定BALF中TPL含量。BALF中加入２倍体积的氯仿－甲醇（2:1，v/v）萃取液，震荡1min，离心（2500r/min）10min，可见液体分层，弃上层液但保留界面杂质。加入1/4体积的甲醇－水（１:1，v/v）萃取液，震荡1min，离心（2500r/min）10min，可见液体分层，弃上层液及界面杂质，用氮气吹干，即得到萃取的磷脂，-20℃保存待测。将1ml高氯酸加入磷脂中加热，温度逐渐上升，直至颜色由黑变白，磷脂完全氧化，

7、继续加热蒸干高氯酸。采用磷钼蓝比色法测定所得样本中无机磷含量。磷脂中磷含量约为４%，算出磷脂含量及每公斤体重磷脂含量。　　1.2.5动脉血氧分压(PaO2)的测定给药后4h后，经左颈动脉取血0.5ml，立即用ABL500型酸碱仪测定其PaO2。　　1.2.6BALF中AKP、LDH、TP的测量根据试剂盒说明书测定AKP、LDH的含量。考马斯亮蓝G-250法测定TP含量。　　1.2.7统计学处理实验数据均以x±s表示,以方差分析进行统计学分析,P<0.