受体介导的cmyc反义核酸抑制肝癌bel74

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1、受体介导的cmyc反义核酸抑制肝癌Bel74【摘要】　　目的探讨半乳糖受体介导的cmyc反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide，ASODN)抑制肝癌Bel7402细胞增殖的机制。方法cmycASODN与半乳糖(galactose,Gal)聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)相作用形成GalPEIASODN复合物，作用于人肝癌Bel7402细胞，通过流式细胞仪检测细胞周期、AnnexinVFITC和碘化丙啶（PropidiumIodide,PI）双染色、DNA电泳实验观察GalPEIASO

2、DN对Bel7402细胞的作用。结果采用流式细胞仪检测细胞周期，细胞对照组、GalPEI对照组、ASODN对照组，细胞增殖指数分别为35.04%、33.95%、32.90%，GalPEIASODN组细胞增殖指数为23.65%，与细胞对照组相比，subG1期＋G0/G1期细胞总数从64.03%增加到76.74%，S期＋G2/M期的细胞从35.04%减少为23.65%，GalPEIASODN组细胞增殖指数下降11.39%，差异显著（P<0.01）。采用细胞凋亡检测试剂AnnexinVFITC/PI双染检测细胞坏死情况，细胞对照组细胞凋亡率2.77

3、%，坏死率3.06%，正常细胞率94.13%；ASODN对照组、GalPEI对照组细胞凋亡率均在4%以下，坏死率均在6.8%以下；GalPEIASODN组细胞凋亡率6.5%，坏死率15.9%，正常细胞率下降为76%。DNA电泳实验中，GalPEIASODN组未发现细胞凋亡的DNA梯形条带，相反出现了弥散条带。结论半乳糖受体介导的cmyc反义核酸通过阻止细胞从G0/G1期细胞向S期的转变，诱导细胞坏死，达到抑制细胞Bel7402增殖的作用。【关键词】cmyc　反义核酸　肝癌　细胞坏死　细胞周期　　MechanismofcmycAntisenseOl

4、igodeoxynucleotideMediatedbyReceptorontheProliferativeInhibitionofBel7402CellsKeyyc;Antisenseoligodeoxynucleotide;Hepatocellularcarcinoma;Necrosis;Apoptosis　　cmyc基因是人们发现较早的一种原癌基因，cmyc蛋白是一种具有DNA结合功能的转录因子，启动细胞增殖，抑制细胞分化，参与细胞凋亡。人类许多肿瘤可检测到cmyc基因的异常表达，如白血病、淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、肝癌、头颈部肿瘤、食管癌、胃癌、结肠癌

5、等。在正常肝组织，cmyc基因低表达或不表达，在原发性肝癌的癌组织及癌周组织中，cmyc蛋白表达水平显著性升高；cmyc蛋白表达与肝癌的发生、发展密切相关，而且与肝癌的分期、预后有关[1,2]。cmyc反义核酸能抑制人肝癌细胞生长[3]。单纯反义寡核苷酸(Antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)导入细胞的效率不高，而受体介导的反义核酸投递系统则具有高效、靶向的特点[4]。肝细胞表面具有脱唾液酸糖蛋白受体等5种专一性受体，能识别末端带有半乳糖残基的糖蛋白或人工合成的配体并与之结合，这种配体－受体的结合是非常高效的。前期实验采用

6、半乳糖(Galactose,Gal)聚乙烯亚胺（polyethyleneimine,PEI）交联载体与cmycASODN形成GalPEIASODN复合物，构成以肝细胞膜半乳糖受体为靶向的反义核酸投递系统，作用于人肝癌Bel7402细胞，证明半乳糖受体介导的cmyc反义核酸对人肝癌Bel7402细胞具有靶向投递作用并能高效抑制该细胞的增殖[5]，本实验旨在探讨cmyc反义核酸抑制Bel7402细胞增殖的作用机制。1材料与方法1.1主要试剂及仪器半乳糖－聚乙烯亚胺(GalPEI)转染试剂（法国PolyplusTransfection公司）。cmy

7、c反义核酸的合成：针对cmyc基因核苷酸序列162～179设计反义寡脱氧核苷酸并进行全程硫代修饰，上海生物工程公司合成，设计序列如下：5′CTTCTCGAGGCAGGAGGG3′，AnnexinVFITC/碘化丙锭（PropidiumIodide，PI）细胞凋亡检测试剂盒（美国BenderMedsystems公司和北京宝塞生物技术公司）。CO2培养箱(德国Heraeus公司)，流式细胞仪(美国BectonDickinson公司)，Quantimet970凝胶图像分析仪（英国剑桥仪器公司）。1.2细胞培养Bel7402肝癌细胞由中山大学北校区生化教研室惠赠

8、。细胞培养