凝聚胺法交叉配血试验

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1、WORD格式可编辑凝聚胺法交叉配血试验操作规程[目的]保证交叉配血试验准确，确保临床输血安全。[适用范围]XXX医院输血科[职责]具有专业技术的工作人员主要负责XXX医院输血标本的交叉配血试验，但只对该单份标本负责。[相关文件]试剂采购、保存和使用管理程序设备采购、使用管理程序消毒与清洁管理程序标本采集、运输、保存和报废管理程序紧急用血管理程序[相关记录]仪器设备的采购、使用和维护记录仪器的温度记录恒温水温箱的换水和消毒记录消毒液的配置记录清洁消毒记录试剂采购、使用记录标本交接和报废记录交叉配血记录紧急用血记录[实验原理]　　红细胞表面带有

2、大量的负电荷，以避免产生自发性聚集，当红细胞悬浮在电解质中时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引，此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕而形成Zeta电位，Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。凝聚胺技术首先利用低离子溶液（LIM）降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞与血清（血浆）中的抗体结合。其次加入的凝聚胺（Polybrene）溶液是一种高价阳离子多聚物、肝素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞的Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的凝集。最后加入的悬浮液（Re

3、suspending）具有中和凝聚胺（Polybrene）阳离子的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝集而不会散开，试验结果为阳性。[仪器器械]　　玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、交叉配血专用离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。[试剂]生理盐水、凝聚胺试剂、Anti-humanIgG血清，均为有合格证件的正品。[试剂保存和稳定性]专业技术资料整理分享WORD格式可编辑1．凝聚胺试剂须保存在2-25℃（其中阴、阳对照血清应储存在2~8℃）。在适当

4、储存条件下有效期24个月。2．抗人IgG血清低温冰箱保存。复溶后放2—4℃冰箱保存。3．凝聚胺试剂①低离子介质溶液（LIM）：含葡萄糖，乙二胺四醋酸-2钠及稳定剂。②凝聚胺溶液（Polybrene）：含凝聚胺，氯化钠及稳定剂。③复悬液（Resuspending）：含柠檬酸钠，葡萄糖及稳定剂。④阳性对照血清：含抗D血清、氯化钠及稳定剂。⑤阴性对照血清：含AB血浆、氯化钠及稳定剂，不含红细胞血型抗体。[标本收集与处理]1、受检者血清：采集受检者静脉血2~3ml，经1000r/min离心1分钟或室温静置1小时后取上清。2、2~5%的受检者红细胞：

5、采集受检者静脉血或末梢血，先用生理盐水洗涤红细胞3次，再根据下表进行红细胞悬液的配制。悬液浓度（%）压积红细胞（滴）盐水（滴）2140(2ml)5116(0.8ml)3、以上标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，输用过血液或血液制品，且输用时间超过12小时的，必须重新采集标本。4、标本出现中度以上溶血者，为不合格标本，不能用于检测。[实验方法与步骤]1、分别制备受血者和献血者3~5%的红细胞悬液（取2支使管分别标注为受血者管和献血者管，再分别加入2ml生理盐水，在受血者管加入1滴受血者红细胞，在献血者管加入1滴献血者红细胞，混匀后备用）。2

6、、取4支使管，分别标注主侧、次侧、阴性对照和阳性对照：主侧管：先加入2滴受血者血清（血浆），再加入1滴献血者2~5%红细胞悬液；次侧管：先加入2滴献血者血清（血浆），再加入1滴受血者2~5%红细胞悬液；阴性对照管：先加入2滴阴性对照血清，再加入1滴献血者2~5%红细胞悬液；阳性对照管：先加入2滴阳性对照血清，再加入1滴献血者2~5%红细胞悬液。3、混匀后各加入LIM溶液0.65ml，轻轻混匀，于室温下静置1分钟。4、再各加入2滴Polybrene溶液，轻轻混匀，于室温下静置15秒。5、用交叉配血专用离心机3400r/min（相当于1000g

7、离心力）离心10秒，然后倒掉上清液（不要沥干），让管底残留约0.1ml液体。6、轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。重做后仍然没有凝集现象出现，可能试剂失效。7、最后各加入2滴Resuspending溶液，轻轻摇动试管并同时目测凝集是否散开，再进一步倒在玻片上用显微镜观察凝集是否散开。如果在60秒内凝集散开，表明是由Polybrene引起的非特异性凝集，配血结果相合；如果凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。如果想进一步检测Anti-K抗体，则必须继续做辅助性的抗球蛋白试验，步骤如下：8、再滴入

8、1滴Resuspending溶液。专业技术资料整理分享WORD格式可编辑9、用生理盐水洗红细胞3—5次，并把最后一次上清液完全倒干。10、滴入2滴Anti-humanIgG血清，