甘草次酸对中药活性成分与血清蛋白结合的影响

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1、甘草次酸对中药活性成分与血清蛋白结合的影响【摘要】目的研究甘草次酸(GA)对中药活性成分与牛血清白蛋白(BSA)结合的影响。方法利用多种光谱技术和毛细管电泳前沿分析方法测定，用Stern-Volmer方程和Scatchardplot等对数据进行处理。结果得到甘草次酸与BSA的结合常数、位点数等结合特征，中药活性成分与BSA结合的常数和甘草次酸对这些成分结合常数的影响。结论甘草次酸与牛血清蛋白有高、低两类结合位点，总的结合位点数为8，蛋白与GA浓度之比为0.38时，结合率已高达95％。GA使中药活性成分与牛血清蛋白的结合常数下降最大达67%，可能对它们的药理作用产生影响

2、。【关键词】中药活性成分；牛血清白蛋白；甘草次酸；药物-药物相互作用　　　　Abstract：ObjectiveToevaluatetheinfluenceofglycyrrhetinicacid(GA)onthebindingofactiveingredientsofChineseherbsalbumin.MethodsSpectroscopicmethodandcapillaryelectrophoresisfrontalanalysisinethebindingdata.Stern-VolmerequationandScatchardplotayexertani

3、nfluenceontheirpharmacologicalaction　　Keyalbumin;Glycyrrhetinicacid;Drug-druginteraction　　近年来，中药活性成分与血清白蛋白结合的研究已经出现热潮，如，桑色素［1］,岩白菜素［2］,芒果苷［3］,大黄素［4］等。然而绝大多数研究以获得活性成分的结合特征为目的，只有极少数研究探讨中药活性成分相互之间对结合的影响。如中国药科大学李萍研究小组最近对中药汤剂的整体成分与血清白蛋白的结合进行了研究，发现当归补血汤成分间对各自与BSA的结合有显著影响［5］，在金银花整体活性物质与牛血清白蛋白相

4、互作用中，绿原酸等3种成分在整体成分与BSA结合时比单个成分与BSA结合程度低，而咖啡酸、芦丁则相反［6］。可见，中药活性成分与蛋白结合时相互之间确实存在协同效应。甘草是最常用的中药之一，也是常用食品添加剂；甘草中甘草酸含量较大（3%～10%）［7～9］，是甘草中最具特色的活性成分之一；甘草酸在体内代谢后以甘草次酸的形式吸收进入血液。因此，本文研究了甘草次酸对中药活性成分与血清蛋白结合的影响，尝试从成分之间血浆蛋白结合的协同效应（药物-药物相互作用）探讨甘草的配伍规律，同时对甘草及相关药物的安全、合理用药提供参考。　　1仪器与材料　　1.1仪器　　F-4500型分子荧

5、光分光光度计（Japan，Hitachi）；Tu-1800SPC型紫外-可见光分光光度计(北京普析公司)；1cm石英比色皿；微量注射器；微型旋涡混合器，精密天平（Germany,Sartorius），pHS-3酸度计。J-810圆二色分光光度计（Japan，Jasco）；彩陆毛细管电泳系统（北京，中科院化学所），配紫外检测器和H×50μmi.d.，有效长度为44cm（中国河北永年光学纤维公司）；超滤管，截留分子量15000（PALLFILTERCO.,LTD,USA）；TGL－16型高速台式离心机（湘仪）。　　1.2试剂　　牛血清白蛋白（Roche），以水配成2.0×

6、10-5mol/L的储备溶液，4℃保存备用；18β－甘草次酸（GA，≥97%,Fluka,productofSpain）；槲皮素、金丝桃苷、芦丁、槲皮苷、山萘酚、大黄酸、大黄素对照品，购自中国药品与生物制品检定所（中国北京）；甲基莲心碱（由中南大学湘雅医院药剂科刘韶惠赠，HPLC纯度大于98％）；中药活性成分均以90%甲醇配成2.5×10-3mol/L的溶液；pH7.40的Tris-HCl缓冲溶液；Tris（淮安和元化工有限公司），氯化钠二水磷酸二氢钠（河南焦作），盐酸（湖南师范大学化学试剂厂）。除已标明者外，试剂均为分析纯；水为双重蒸馏水。　　2方法　　2.1光谱实

7、验方法　　2.1.1荧光猝灭方法　　在10ml容量瓶中依次加入2ml0.50mol/LNaCl溶液、2mlpH7.40的Tris-HCl缓冲溶液、2mlBSA储备溶液，以水定容为10ml,摇匀,在一定温度下静置30min。取该溶液1ml于石英比色皿中，依次加入一定体积的中药活性成分溶液（加入总量＜0.03ml)，旋涡混匀。经指定温度下恒温放置3min后，在280nm的激发波长下，扫描290～420nm荧光光谱。在相同条件下，测其紫外光谱。甘草次酸对中药活性成分的影响是在蛋白中先加入GA，然后按照上述方法进行。在实验条件下活性成分在290～450nm范