反相高效液相色谱法测定不同溶媒煎煮生化汤中阿魏酸的含量

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1、反相高效液相色谱法测定不同溶媒煎煮生化汤中阿魏酸的含量作者：王雁梅邢志霞史恒军王保秀【摘要】目的比较不同溶媒煎煮的生化汤中阿魏酸含量的变化。方法采用反相高效液相色谱法进行测定。结果不同溶媒煎煮对阿魏酸的溶出率有影响（P<0.01），其中以用黄酒、童便各半煎煮，阿魏酸煎出量最高。结论生化汤的传统煎煮方法具有合理性。【关键词】阿魏酸生化汤溶媒反相高效液相色谱法　　Abstract：ObjectiveToparethecontentsofferulicacidinShenghuatangdecoctedindifferentsolvent.MethodsThecontentsof

2、ferulicacidinedbyRPHPLC.ResultsDecoctingindifferentsolventhadinfluenceonthecontentsofferulicacidandthecontentsilletethodofdecoctingherbsisreasonable.　　KeychuanxiongHort.的干燥根茎；桃仁为蔷薇科植物桃Prunuspersica（L.）Batsch.的干燥成熟种子；炮姜为姜科植物姜ZingiberofficinaLeRosc.的干燥根茎的炮制加工品；炙甘草为豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFis

3、ch.的干燥根及根茎的炮制加工品。样品凭证保存于我科。　　黄酒为市售浙江绍兴县第三酒厂生产，童便为24h内所收集的1名1.5岁健康男童中段尿液。　　2方法与结果　　2.1色谱条件及系统适用性实验对阿魏酸对照品的甲醇溶液进行紫外扫描显示，在234nm和321nm处紫外吸收较强。由于在321nm处有最大吸收且干扰少，故选择321nm为检测波长。固定相为日本GLSciences公司InertsilODS－3C18反相柱（250mm×4.6mm，5μm），C18预柱（大连化学物理研究所）；流动相为甲醇－1%冰醋酸水溶液（45∶55，v/v）；流速1.0ml·min-1；柱温为室温。进样量

4、20μl。　　理论塔板数按阿魏酸计算，不低于3000，阿魏酸与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5。　　2.2对照品溶液和供试品溶液的制备　　2.2.1对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品0.36mg，甲醇溶解后，用流动相定容于10ml棕色容量瓶中，得36.0mg·L-1对照品贮备溶液。从中精密量取适量，用流动相配成浓度为0.6，1.2，2.4，4.5，9.0，18.0，36.0mg·L-1的系列标准工作液。　　2.2.2生化汤的制备1号煎液按原方准确称取各味药共43g，混匀后置于1000ml烧杯中，第1次加水360ml，室温下浸泡30min，煮沸后文火煎30min，用4层医用纱布滤

5、过，残渣加水270ml重复以上过程，合并两次滤液，浓缩至100ml，每毫升药液含0.43g生药。　　2～4号煎液按原方准确称取各味药组成3剂，分别置于3个1000ml烧杯中，溶媒的添加见表1，余煎煮方法同1号煎液，即采取相同的浸泡时间、煎煮火候、煎煮时间、第2次相同的加水量及浓缩方法，得到100ml药液，每毫升药液含0.43g生药。　　另按1号煎液操作制备不含当归、川芎的水煎液作为阴性对照液。　　表1生化汤不同煎液中溶媒的选择（略）　　2.2.3样品的制备分别精密量取以上各煎液145μl于10ml离心管中，加入流动相4855ml，电动混匀3min，4000r·min-1离心5mi

6、n，取上清分别过0.25μm微孔滤膜后，取续滤液备用。此得到1～4号样品及阴性对照液，作为供试品溶液。　　2.3HPLC测定　　2.3.1标准工作曲线的绘制分别精密吸取阿魏酸系列标准液20μl，注入高效液相色谱仪，测定。以对照品峰面积（Y）为纵坐标，以对照品溶液浓度（mg·L-1，X）为横坐标，绘制标准工作曲线。所得回归方程为：Y＝84840.72X－6658.3（r＝0.9999，n＝6）。结果表明，阿魏酸在0.6～36.0mg·L-1范围内呈良好线性关系。最低检测限为0.58ng（S/n＝3）。　　2.3.2精密度、稳定性与回收率实验精密吸取对照品低、中、高3个浓度，在24h

7、内测定其日内精密度，在6d内测定日间精密度，结果平均日内精密度RSD＝2.08%（n＝5），平均日间精密度RSD＝1.56%（n＝5）。　　精密吸取同一份样品（1号样品）20μl，分别间隔一定时间进样，测定5次，结果48h内RSD＝1.45%。　　精密吸取已测定含量的1号样品(3.64mg·L-1)，分别加入一定量的对照品溶液，电动混匀后，4000r·min-1离心5min，取上清分别过0.25μm微孔滤膜后，20μl进样，测定，平均回收率为102.3%，RSD＝1.2%。.L.