实验---蛋白质的沉淀反应与颜色反应

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1、实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。熟悉蛋白质的沉淀反应，进一步熟悉蛋白质的有关反应。二、实验原理蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应，因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。另外，颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相对的。如果条件发生了变化，破坏了蛋

2、白质的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。三、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、pH试纸6、水浴锅7、移液管四、实验试剂1、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍，3-4层纱布过滤，滤液放在冰箱里冷藏备用。2、0.5%苯酚：1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。3、Millon’s试剂：40g汞溶于60ml浓硝酸（水浴加温助溶）溶解后，冷却，加二倍体积的蒸馏水，混匀，取上清夜备用。此试剂可长期保存。4、尿素晶体5、1%CuSO4：1gCuSO4晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml6、10%NaOH：10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至1

3、00ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.9、冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液：100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。12、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。13、95%乙醇。14、醋酸铅溶液：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、10%三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液：100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。18、1%醋酸溶液。五、实验步骤蛋白质的颜色反应（一）  米伦（Millon’s）反应1、苯酚实验：取0.5%苯酚溶液1ml

4、于试管中，加Millon’s试剂0.5ml，电炉小心加热观察颜色变化。2、蛋白质实验：取2ml蛋白液，加Millon’s试剂0.5ml，出现白色的蛋白质沉淀，小心加热，观察现象。（二）  双缩脲反应1、取少量尿素晶体放在干燥的试管中，微火加热熔化，至重新结晶时冷却。然后加10%NaOH溶液1ml，摇匀，再加2-4滴1%CuSO4溶液，混匀，观察现象。2、取蛋白液1ml，加10%NaOH溶液1ml，摇匀，再加2-4滴1%CuSO4溶液，混匀，观察现象。（三）  黄色反应取一支试管，加入1ml蛋白液及浓硝酸5滴。加热，冷却后注意颜色变化。然后

5、再加入10%NaOH溶液1ml，观察颜色有什么变化。（四）  茚三酮反应取蛋白液1ml于试管中，加4-8滴茚三酮溶液，加热至沸，即有蓝紫色出现。蛋白质的沉淀（一）蛋白质的盐析作用1、试管中加蒸馏水3ml，加固体硫酸铵至饱和。另一支试管加蛋白液2ml，再加入饱和硫酸铵溶液2ml，摇匀静置观察现象。2、将上述混合液过滤。向滤液中逐渐加入少量固体硫酸铵，直至饱和为止，此时析出为清蛋白。再加入少量蒸馏水，观察沉淀是否溶解。（二）有机溶剂沉淀蛋白质试管中加蛋白液1ml，加晶体氯化钠少许，溶解后加95%乙醇3ml,摇匀，观察现象。（三）重金属盐与某些

6、有机酸沉淀蛋白质1、取试管2支，各加蛋白液2ml，一支管中滴加1%醋酸铅溶液，另一支管中滴加1%硫酸铜溶液，至有沉淀产生。2、取一支试管加蛋白液2ml，再加入10%三氯乙酸1ml，充分混匀，观察结果。（四）生物碱试剂沉淀蛋白质取一支试管，加入蛋白液2ml及醋酸4-5滴，再加饱和苦味酸数滴，观察现象。六、实验结果蛋白质的颜色反应（一）  米伦（Millon’s）反应1、苯酚实验：溶液即出现玫瑰红色。2、蛋白质实验：出现白色的蛋白质沉淀，小心加热后凝固的蛋白质出现红色。（二）  双缩脲反应1、有紫色出现。2、溶液有蓝紫色出现（三）  黄色反应

7、先有黄色沉淀生成，加入10%NaOH溶液1ml后颜色变为橘黄色。（四）  茚三酮反应有蓝紫色出现。蛋白质的沉淀（一）蛋白质的盐析作用1、有蛋白析出。2、有蛋白质析出，加水后可复溶。（六）有机溶剂沉淀蛋白质取一试管加蛋白液1ml，，加入晶体氯化钠少许，待溶解后再加95%乙醇3ml,摇匀，观察现象（七）重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白质取试管2支，各加蛋白液2ml，一支管中滴加1%醋酸铅溶液，另一支管中滴加1%硫酸铜溶液，至有沉淀产生。（八）生物碱试剂沉淀蛋白质取一支试管，加入蛋白液2ml及醋酸4-5滴，再加饱和苦味酸和鞣酸数滴，观察现象。七、实

8、验分析蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。其中米伦试剂能与苯酚及某些二羟基苯衍生物起颜色反应，而组成蛋白质的氨基酸