多肽类结核杆菌抗原激活的γδ t细胞表达抗原提呈

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1、多肽类结核杆菌抗原激活的γδT细胞表达抗原提呈【摘要】目的:观察用多肽类结核杆菌耐热抗原(MtbHAg)激活的人外周血γδT细胞是否具有抗原提呈细胞的表型和抗原提呈作用。方法:外周血单个核细胞(PBMC)经贴壁法获取单核细胞,加GMCSF,IL4和LPS培养诱导为成熟DC。PBMC用MtbHAg优势扩增γδT细胞后用流式分选纯化γδT(Vδ2+)细胞。PBMC经尼龙毛柱法获得纯化T细胞,用CFSE标记后单独加Mtb分泌性抗原(MtbSAg),或加单核细胞和MtbSAg共同培养,或与经MtbSAg预处理的成熟DC或活化γδT细胞共同培养。第11天时用流式细胞术检测CD4+T细

2、胞的增殖。MtbHAg活化的γδT细胞与FITC标记的MtbSAg孵育不同时间后用流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测摄入情况。结果:MtbHAg活化的γδT细胞CD80,CD86和MHCⅡ类分子的表达显著增加。MtbSAg预处理活化的γδT细胞诱导初始T细胞增殖数和CD4+T细胞增殖指数的活性与成熟DC相似。MtbHAg活化的γδT细胞能摄入FITC标记的MtbSAg。结论:用多肽类MtbHAg激活的γδT细胞具有抗原提呈细胞的表型,并具有摄入和提呈可溶性抗原给初始T淋巴细胞的能力。【关键词】结核分枝杆菌;抗原提呈;T细胞亚群;流式细胞术;激光共聚焦显微镜［Abstract

3、］AIM:ToexploreanperipheralγδTcellsstimulatedbypolypeptideheatresistantantigenfromMycobacteriumtuberculosis(MtbHAg)expressphenotypeandhavethefuctionofantigenpresentation.METHODS:Themonocytesisolatedbyadhesionmethodfromperipheralbloodmononuclearcells(PBMCs)aturedendriticcellsbyaddingLPS.PBMCsulate

4、dinantallyγδTcellsthatPBMCsusingadhesionrevomalandnyloncolumnmethod,labeledonocyteseasuredbyfloetry.TheMtbHAgactivatedγδTcellse,andtheingestionofMtbSAgbyγδTcellseasuredbyfloetryandobservedicroscopye.RESULTS:TheexpressionsofMHCIIandcostimulatorymoleculesCD80andCD86onγδTcellsthatactivatedbyMtb

5、HAgmarketlyincrasedinparisonilartothatinducedbymatureDC.Byusingfloeterandlaserconfocalmicroscope,FITClabellaedMtbSAgulatedbypolypeptideMtbHAgexpressthephenotypeofprofessionalantigenpresentingcellsandtheyareabletopresentMtbSAgtonaveTcellstoinducetheproliferationofCD4+Tcells.［Keytuberculosis;a

6、ntigenpresentation;Tlymphocytesubpopulation;floetry;laserconfocalmicroscope以往的研究表明机体在抗结核杆菌（Mycobacteriumtuberculosis,Mtb）感染免疫中,主要有αβT细胞（CD4＋和CD8＋T细胞）和巨噬细胞发挥重要作用,而近年的许多研究证明,γδT细胞在抗Mtb感染中也起到重要的防御作用,并可能通过与其他免疫细胞之间相互作用,影响机体在抗Mtb感染中的免疫应答过程。在健康人外周血中,γδT细胞仅占T细胞库的2%～10%,根据其TCRδ链V区片段不同又可以分为Vδ1+和Vδ2+二种亚型,V

7、δ1+T细胞主要分布在黏膜上皮和皮肤组织,而Vδ2+T细胞则主要分布在外周血中。已有研究发现Vδ2+T细胞能识别小分子的非肽类抗原,并在此类抗原的刺激下产生显著的扩增［1,2］。有研究发现,从扁桃体分离的未活化的γδT细胞用异戊烯焦磷酸(isopentenylpyrophosphate,IPP)和来自大肠埃希菌的非肽类抗原4羟基3甲基2烯基焦磷酸［(E)4hydroxy3methylbut2enylpyropho