血管性血友病因子体外对胃癌细胞bgc823增殖和

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1、血管性血友病因子体外对胃癌细胞BGC823增殖和【】目的研究血管性血友病因子（vontt）法检测细胞增殖活性和细胞黏附能力的变化；用倒置显微镜观察细胞形态学变化。结果vtt黏附实验结果显示vangastriccancercelllinebgc823invitroin,zhanghong,yangaijun,liuininstituteofpathology,schoolofbasicmedicine,lanzhouuniversity,lanzhou730000,chinacorrespondingauthor:li

2、min,email:limin0606163.abstract：objectivetoinvestigatetheeffectonproliferationandadhesionofvangastriccancercelllinebgc823invitro,andtoclarifyitsprobablemechanism.methodshumangastriccancercelllinebgc823culturedinvitrottcolorimetricassay.thecellmorphologicalchang

3、esicroscope.resultsveandconcentrationdependentmanner.significantcytotoxicityofvorphology.paredentorphologicalchangeinvitro,vportantpartintheprogressofadhesiononthebgc823cells.keyi1640（美国gibco公司）；胰酶（美国amresco公司）；超级新生牛血清（fbs）（杭州四季青生物工程有限公司）；ⅳ型胶原，兰州大学病理研究所自制；四甲基偶

4、氮唑蓝（mtt）及牛血清白蛋白（bsa）（美国sigma公司）；兔抗人v公司）；人胃癌细胞株bgc823购于中国科学院上海细胞生物研究所，经预实验检测显示能够表达vi1640培养液（含100ku/l青霉素,100ku/l链霉素）在37℃、5％co2及饱和湿度的培养箱中维持培养。1.3mtt法测定vl的密度接种于96孔板中，同时每孔加vl，每个浓度平行3孔，对照组加入等体积培养液，置co2培养箱培养。分别于24、48、72h后取出96孔板，弃上清，加200μl／孔无血清rpmi1640及20μl／孔mtt，4h后弃上清

5、，加200μl／孔二甲基亚砜（dmso）震荡10min混匀，待溶解完全后用酶标仪測a570值。细胞增殖抑制率计算公式如下：细胞增殖抑制率（ir％）＝（1－实验组a570／对照组a570）×100％。1.4细胞形态学观察bgc823细胞以5×104／孔的密度接种于6孔培养板内，对照组无干预，常规培养；处理组在培养基中加入vl；每组3个复孔。24、48、72h时分别于倒置显微镜下观察细胞形态及生长状况。1.5黏附抗体抑制实验将vl）加于rpmi1640培养基中，与bgc823细胞共培养48h；将96孔板预先分别用3g／m

6、l及1.5g／mlⅳ型胶原20μl／孔包被，2％bsa封板处理，加入调好的细胞悬液200μl／孔（5×105／ml）；co2培养箱分别孵育30、60、90、120min后，弃去培养液，pbs冲洗除去未黏附细胞；弃pbs后加入mtt20μl，及无血清rpmi1640200μl，co2孵育3h；吸弃培养孔内上清液，加入dmso200μl溶解，噻唑兰显色，酶联免疫检测仪570nm测各孔吸光度（a570）值，同时设立相应的rpmi1640培养对照组。各组重复3次。1.6统计学方法采用spss11.5统计软件进行分析。计量资料以

7、±s表示，组间差异比较采用方差分析和kruskaltt法检测结果显示bgc823细胞的生长受到明显的抑制，随着作用时间延长，抗体浓度增大，增殖抑制率增加，表明抑制作用与浓度和作用时间均呈明显的依赖关系，见表1。表1vin），bgc823细胞在ⅳ型胶原上的黏附增加（p＜0.01），差异有统计学意义；vavonetastasiscolorectalcarcinoma[j]..deficientactivityofvoninatedmalignancies[j].cancerres,1999,59（9）:22442250

8、.［3］eppertk,jays,aneliunasv,etal.vonetastasis[j].modernpathology,2005,18（3）:388397.［4］terraubev,pendur,baruchd,etal.increasedmetastaticpotentialoftumor