急性髓系白血病flt3

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1、急性髓系白血病FLT3第一部分373例急性髓细胞白血病患者临床及分子遗传学特征1.1引言急性髓细胞白血病(AML)是成人最常见的急性白血病，常以发热、感染及出血为起病表现，患者骨髓中可见大量原始细胞。约70%患者经诱导化疗能够达到缓解，但随后绝大多数患者出现复发，需在完全缓解后接受高剂量巩固化疗或造血干细胞移植等巩固治疗以预防复发。分子遗传学标志显著地影响了AML患者的预后。基于染色体核型及部分基因突变的危险分层模式已广泛用于指导临床治疗。根据各种基因突变在AML的发病机制及引起的遗传学异常方面所扮演角色的不同，可将它们大致分为两类：Ⅰ类突变影响细胞

2、信号传导路径，提高白血病细胞克隆的增值优势，如c-KIT，FLT3-TKD，FLTS-ITD等；Ⅱ类突变影响转录因子及协同因子，导致细胞分化受抑，如NPM1，CEBPα，T3A、IDH1/2，RUNX1，PFH6等，但其具体预后意义并不明确。人类FLT3基因又称作胎儿肝脏激酶-2(Fetalliverkinase-2，FLK-2)和人类干细胞激酶-1(humanstemcellkinase-1，STK1)，位于染色体13q12，全长约100kb，含有24个外显子，编码993个氨基酸的蛋白质。其表达产物Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)是Ⅲ型

3、受体型酪氨酸激酶家族成员之一，在正常人骨髓中FLT3的表达仅限于CD34＋干/祖细胞1，其在正常造血及免疫系统发育中起着重要作用。既往研究表明激活的FLT3可以激活PI3K(phosphatidylinositol3-kinase)和RAS途径，导致增殖加快，细胞凋亡抑制2。FLT3基因突变是造成FLT3基因异常活化的主要原因。其突变形式主要表现为两种：近膜结构域内部串联重复(internaltandemduplications，ITDs)突变和TKD或/和JM的点突变(pointmutation，PMs)。两种突变均可造成FLT3酪氨酸激酶的结构性

4、活化。自1996年在急性髓细胞白血病中发现FLT3-ITD以来3，随着检测技术灵敏度的不断提高，现公认的FLT3-ITD在急性髓细胞白血病中的发生率约为25%-30%。多项临床研究都发现此类患者具有特定的临床表现及疾病病程，如常合并初诊时白细胞升高，染色体核型多为正常核型等。FLT3-ITD在AML中提示预后不良，应用于预后危险度分级以制定个体化治疗方案。FLT3-ITD可与NPM1共存，Gorin等发现合并NPM1突变可以改善FLT3-ITD(+)AML患者的预后4。Green等在大样本年轻AML患者中发现FLT3-ITD(+)合并IDH1突变的患

5、者预后较好5，而与FLT3-ITD不常与IDH2突变共存6。FLT3-ITD与其他基因突变如DNMT3A、N-RAS等共存性研究较少，预后情况尚不明确。本研究采用基因组DNA-PCR及基因组测序等方法，评估了我院急性髓细胞白血病患者中初诊时FLT3-ITD突变及其他常见基因突变的发生率及相关性，并比较了FLT3-ITD(+)AML患者与l双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。3.70%、85%和100%乙醇：分别置于室温和-20℃保存备用。4.基因组DNA提纯试剂盒：购自德国Qiagen公司。5.PCR引物：应用Primer

6、Premier5引物设计软件设计引物，并由上海生工生物工程有限公司负责合成。6.PCR2缓冲液：天根生化科技(北京)有限公司(Tiangen)。7.TAE缓冲液：tris242g，Na2EDTA.2H2O37.2g，加入800ml的去离子水，充分搅拌溶解。加入57.1ml的醋酸，充分混匀。加去离子水定容至1L，室温保存。8.Gelred：10,000水溶液，biotium公司9.琼脂糖：BioL)中，分子遗传学异常包括染色体异常及基因突变对患者的危险度分层及个体化治疗中有重要意义15，小于60岁AML患者预后危险度分级标准见表5。约有25%~30%A

7、ML患者合并FLT3-ITD突变16，在患者中呈偏态分布，多见于老年患者。FLT3-ITD(+)AML患者具有特殊的临床表现：起病时白细胞计数明显升高；多为骨髓形态学FAB亚型中的M5亚型；多为染色体危险度分层中的预后中等组，特别是正常核型多见。国内外多项临床治疗指南中均将首次缓解后行异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)作为该类患者一线治疗。我国成人急性髓系白血病(非急性早幼粒细胞白血病)诊疗指南中，建议预后不良组患者采用异基因造血干细胞移植作为缓解后治疗，在寻找供者期间行大剂量阿糖胞苷为基础的化疗巩固，以提高该类患者的临床疗效18。异基因造血

8、干细胞移植是否能改善此类患者预后仍有争议，多个单中心的回顾性研究比较了FLT3-ITD(+)AML患者及L患