微生物实验复习整理

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1、病原微生物实验笔试（操作，示教内界）：题型：1、名解（2个xlO）2、填空（25个x2）3、论述（30分）复习：1.2：常用仪器的使用1、商压蒸汽灭菌：最常川，最奋效的一种湿热灭菌法，通过密闭的商压蒸汽灭菌器，足界器内乐力调至103.4kPa,温度达到121.3°C,维持2（）min-30min，能糸死包括芽孢在内的所冇微生物。适用于包括液体在内的各种耐热、耐潮湿物品的灭歯。1.1.3:常用试剂的配置1、双糖铁培养基：乳糖：G=10:l,若细苘能分解两种糖，因产酸景多，整个培养基由红变黄；若细荫只能分解G，因产酸M少、斜而表而积人，有机酸易挥发氧化，结果为培养基底部

2、变黄，斜則仍保持红色。该培养葙中还含冇亚铁离了，可与硫化氢生成黑色沉淀，故还能观察到某些细菌分解含硫氨基酸产生硫化鉍的情况。木培养基主要用于肠道致病菌的鉴定。2、S-S琼脂培养基：培养基的选择作用体现在煌绿对球菌生长有抑制作用，有助于肠道致病菌的卞长；胆盐、枸橼酸钠、硫代硫酸钠可抑制革兰阳性细菌和人多数的人肠埃希苘属细菌的生长；枸橼酸铁能屮和屮性红的毒性作用，并能与硫代硫酸钠作为还原剂，避免某些细齒产生的硫化氢被铽化。培养菽的鉴别作用体现在不发酵乳糖的沙门歯属和志贺菌属细歯,在平板上形成的菌落不着色，呈半透明。大肠埃希菌能发酵乳糖，产生的算是胆盐沉淀，胆盐与中性红结

3、合后，是菌落成红色，在T板上可见培养基中红色成什的乳浊状沉淀。某些变形杆菌和沙门菌还能分解含硫氨基酸产生硫化氢，使菌落中心呈黑色。另外，细菌在其上分解蛋白质产生氨气等碱性代谢产物，使培养基pH升高，培养基由红变黄。3、沙保弱培养基：主要川于真蘭的分离培养。2.1.1:普通光学显微镜的使用及保护1、显微镜的使用2.2.2：活菌运动的观察1、鞭毛是细菌的运动器官，许多杆菌和弧菌有鞭毛，而球菌一般无鞭毛。有鞭毛的细菌可在液体培养基中做定向运动，起到趋利避害的作用。因此，有鞭毛的活菌在丛微镜下可呈活泼奋方昀的运动，无鞭毛的细苘则呈不规则的布朗运动。奋穿刺法、压滴法和悬滴法。

4、2.2.4：细菌的革兰染色法1、革兰染色：原理（细胞壁学说为重点）（3分），步骤（4分），结果（2分），意义（1分）原理：G+菌细胞壁结构比较致密，肽聚糖含量高且交联度大，脂质含量少，乙醇脱色过程屮，里然能溶解细胞壁的脂质而在壁上形成小孔，但脱水作用使细胞壁收缩构成屏障，通透性降低，组织细胞A的结晶紫-碘S合物一处，细胞仍保留结晶紫初染的紫色。而G-歯细胞壁结构较为疏松，肽聚糖s较薄，厚厚的外膜含有丰富的脂质，：n有好脂溶作用的乙醇溶解脂质，细胞壁通透性增高，细胞内的结品紫-腆复合物溢出，细菌脱色，经复染后即呈红色。步骤：涂K（1滴生理盐水，涂开）、干燥（自然干燥）

5、、固定（来回通过火焰三次）；染色（结晶紫初染，1分钟；碘液媒染，1分钟；95%乙醇脱色，半分钟；复红复染，丨分钟）及镜检（油镜下观察结果）。意义：讨以观察细菌的形态大小、排列方式等，还讨以根据染色结果将所有的细菌区分为G+和G-菌，右助于鉴别细菌，并未分析细菌的致病性和选用抗菌药物提供依裾。2.2.5:细菌的抗酸染色法1、抗酸染色是细菌卷色后不被盐酸乙醇脱色的染色方法，主要用于鉴定细菌的抗酸性。抗酸性阳性苘的细胞壙脂质含景丰富，一般不易着色，通过加热或延长染色吋间促使苯酚复红渗透使K着色r，分枝菌酸即表现出抵抗盐酸乙醇脱色的能力，孤军踢被染成红色。而K他非抗齒酸被木

6、分S红着色后，易被盐酸乙醇脱色，蛣后被亚甲蓝染成蓝色。2、步骤：先用无菌棉签沾痰液标本，直接在清洁载玻片中央涂成菌膜，ft然干燥后，火焰固定；滴加苯酚S红液与图Rt，之酒精灯火焰h缓缓加热，至冇蒸气胃出，维持5min，冷却后，川流水漂去多余染液;滴加3%盐酸乙醇脱色液于菌膜表面，轻轻晃动涂片保持30-60S,直至标本最厚出无红色脱出为止，用流水轻轻洗净脱色液；滴加碱性亚甲蓝液复染lmin,用流水轻轻洗净S染液；用吸水纸轻轻吸干载玻片表Ifti的水滴，待标木干燥后于油镜下观察结果。2.3.9：基础培养基的制备1、培养基：由适合于细菌生长繁殖所需的多种营养物质配制而成的

7、基质（4分）。合格的培养基，需要具冇充足的营养，一定的酸碱度，且清亮无菌（6分）。2、培养基类型凝固剂添加主要用途液体培养基未添加快速增菌培养，细菌屮长动态观察，细菌牛化反应检测闹体培养基2%-3°/。琼脂平板可用于细菌的分离纯化、鉴定、计数及药物敏感试验，斜面可川于菌种的短期保存半固体培养基0.5%-0.8%琼脂细菌动力学观察，菌种的保存，细菌生化反应的检测。2.3.10：细菌接种法和生长现象观察1、通过在平板表淅划线，培养沿得到的由单个细歯生而形成的细歯集团称为菌落。2、无菌操作3、在液体培养基中，细菌可呈现浑浊牛.长、沉淀生长、菌膜生长三种生长现象。2.3