对应用冻存后的去t细胞脐血作造血重建

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1、对应用冻存后的去T细胞脐血作造血重建-->对应用冻存后的去T细胞脐血作造血重建——论文代写关键词：低温；保存；T细胞脐血目前的研究表明,非血缘关系的脐血移植(umbilicalcordbloodtransplantation,CBT)也是重要的造血干细胞[1]。而脐血库的建立为开展配型不合的CBT提供了保证。但是,CBT可能发生移植物抗宿主病(graftversushostdisease,GVHD),尤其是配型不合的CBT,从而影响移植成功率。免疫毒素(immunotoxin,IT)能有效去除脐血T细胞而对造血祖细胞无明显影响

2、[2],为预防重度GVHD提供了有效手段。我们观察了IT去除脐血T细胞后的冻存效果。报告如下。脐血收集无菌条件下在医院里正常分娩的健康产妇,在其胎盘未脱离母体前在脐带断端留取脐血标本10份,加肝素25U/ml抗凝,置4℃冰箱存放不超过24h。主要试剂及材料IT为军事医学科学院基础医学研究所赠送,重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)及促红细胞生成素(EPO)为日本麒麟啤酒株式会社产品。实验方法1.脐血单个核细胞(mononuclearcell,MNC)的分离:取7~10ml脐血,用4倍生理盐水进行稀释,将标本缓慢加

3、入含淋巴细胞分离液的离心管中,2500r/min,离心20min。吸出界面单个核细胞,用生理盐水洗2遍,制成所需浓度的细胞悬液。2.IT处理脐血的方法[2]:将脐血标本分成2份,一份为全血,另一份为MNC。将脐血MNC调为1×106/ml~1×107/ml,悬浮于10%胎牛血清(fetuscalfserum,FCS)-1640-100mmol/L半乳糖体系中,使抗CD5T细胞免疫毒素(CD5ricin,10-10mmol/L)分别作用于上述细胞悬液,在37℃、5%CO2饱和湿度的条件下孵育2h,以1640液洗2遍。并分别制成所

4、需浓度的细胞悬液。按下述“5”的方法冻存。3.锥虫蓝染色法测定细胞活力4.造血细胞的培养:脐血MNC及全血的造血祖细胞培养:粒-单系集落形成单位(colonyformingunit-granulocyteandmacrophageCFU-GM);红系集落形成单位(burstformingunit-erythroid,BFU-E)按-->A,etal.Outesamong562recipientsofplacental-cordbloodtransplantsfromunrelateddonors.NEnglJMed,1998,

5、339:1565-1567.2．许蔓春,吕善根,沈倍奋,等.免疫毒素去除脐血T细胞效应及对造血祖细胞的影响.中华儿科杂志,1998,36:171-174.3．黎燕,沈倍奋,陈兴,等.抗T免疫毒素对骨髓T细胞清除效应及对造血祖细胞的影响.中国免疫学杂志,1989,5:197-200.4．黎燕,贺永怀,陈兴,等.CD9、CD8单克隆抗体免疫毒素对白血病细胞的清除效率及对造血细胞的影响.中国免疫学杂志,1991,7:303-306.5．朱为国,邢献志,吴蔼,等.人脐血造血干细胞低温保存效果观察.中华血液学杂志,1994,15:201

6、-202.6。BroxmeyerHE,CooperS.High-efficiencyrecoveryofimmaturehaematopoieticprogenitorcellshumancordbloodcryopreservedfor10year.ClinExpImmunol,1997,107(Suppl1):45-53.7．汪声恒,黄友文.造血祖细胞活力冷冻损伤的可复性.中国应用生理杂志,1991,7:328-330.