气压致离体中枢神经细胞损伤模型

《气压致离体中枢神经细胞损伤模型》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、气压致离体中枢神经细胞损伤模型摘要:目的建立一种空气高压力方法导致体外培养神经细胞的损伤模型，用于中枢神经系统各个细胞群及单个细胞在损伤中反应的研究.方法在空气高压的状态下致神经细胞损伤，并利用碘化丙啶（PI）荧光探针不能穿过正常的细胞膜、当细胞膜损伤后其通过细胞膜并与细胞核的DNA结合、在荧光显微镜下显红色及乳酸脱氢酶（LDH）的测定来检测细胞损伤.结果当空气压力增加到1.0MPa时，细胞损伤较对照组明显增加，压力增加到1.5MPa时，得到较为理想的损伤模型.结论本神经细胞损伤模型适合神经细胞损伤的病理、生理及生物化学的进一步研究.　　Keyodel;ai

2、rpressure;propidiumio-dide;lactatedehydrogenase　　Abstract:AIMToestablishamethodofculturedneuronin-jurymodelsbyhighairpressureforthestudyofinjuredcellgrouporsinglecellinthecentralnervoussystem（S）.METHODSNeuroninjuringmodeliodide（PI），cellembraneshoeea-suredspectrophotometrically.RESU

3、LTSHighairpressureof1.0MPacausedneuroninjuryandgottheidealinjuringmodelbytheairpressureof1.5MPa.CONCLUSIONThismodelisappropriateforstudyingthebiochemistryandpatho-physiologyofneuroninjury.　　0引言　　大体脑损伤模型及脑损伤的研究已取得了一些进展，这些研究是作为脑器官整体状态下的研究结果，对于其损伤后整个功能变化的结果和治疗效果有很大意义［1，2］.但是，上述的研究方法对于

4、中枢神经系统各类细胞在损伤中的反应还不能得到令人满意的结果，因而，体外培养细胞或组织片损伤模型［3-6］的建立为这类研究提供了方便.本实验设计采用气体迅速加压的方法，使培养的神经元和神经胶质细胞损伤，以用于中枢神经系统各个细胞群及单个细胞在损伤中反应的研究.　　1材料和方法　　1.1神经细胞培养新生1d大鼠在无菌条件下切取鼠脑全脑，放入平衡盐液，切成约0.5mm3碎块.将脑碎块移入12mL试管，用平衡盐液洗涤3次，依次洗涤后使组织块充分沉降到试管底部，弃上清.加入0.25gL-1胰蛋白酶（溶于平衡盐液）10mL，37℃培养箱培养15min.将上述混悬液通过硅

5、化的Pasteur滴管，充分捣碎组织，至得到单细胞悬液止;必要时用尼龙筛过滤.静置3～5min，使小组织块沉降至试管底并用Pasteur滴管将其除去.200rmin-1离心5min，弃上清.用培养液重新悬浮细胞，接种于培养皿，每皿接种（2.5～3.0）×106个细胞.培养2d后用含10μmolL-1胞嘧啶阿拉伯糖的培养液培养24h，然后改为常规培养液.鉴定方法:用破伤风抗毒素作为标记物，免疫组织方法检测，判定神经元细胞［7］.　　1.2细胞损伤培养好的神经细胞贴壁，分别放置于动物加压舱中，实验用空气为人工配制压缩空气（40molL-1氮氧混合气体），实验分为

6、A，B，C及对照组，在室温下（26℃），分别给予空气压力0.5，1.0和1.5MPa，停留5min，对照组置于自然环境中，实验后用胰酶消化细胞收集至离心管中离心待检测.　　1.3检测方法①细胞膜完整性检测:碘化丙啶（propidiumiodide，PI）不能穿过正常的细胞膜，当细胞膜损伤后，其通过细胞膜并与细胞核的DNA结合，在荧光显微镜下显色，这种方法曾被用以检测细胞损伤［8，9］.按每毫升细胞培养液中加入浓度1gL-1的PI10μL，置室温下10min，荧光显微镜下检测并计损伤细胞数;②乳酸脱氢酶（LDH）的测定:细胞损伤后释放乳酸脱氢酶（LDH），用0

7、.25gL-1胰蛋白酶消化实验模型的细胞，放入离心管中离心，取上清液，按岛津自动生化分析仪CL-700型的操作规程说明检测LDH活力.每组实验用二硝基甲苯（TritonX-1001mL20mLL-1）使细胞溶解，测定全部的LDH值，以计算损伤细胞的LDH百分比，分别于损伤后10，30min，2，6和24h测定.　　统计学处理:数据以x±s表示，对数据用SPLM统计软件进行t检验和方差分析.　　2结果　　2.1细胞膜损伤PI染色，肉眼荧光显微镜下计数5个视野，荧光显色的细胞总数平均为:A组21，B组32，C组72及对照组12（Fig1～4）.计数结果显示空气压

8、力至0.5～1.5MPa时，均造成不同程度的细胞膜损