叶绿素的定量测定及叶绿素荧光仪分析

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1、叶绿素的定量测定及叶绿素荧光仪分析实验原理叶绿素的定量测定：叶绿素a、b在红光区的最人吸收峰分别位于663nm与645nm，乂，根裾光密度的加和性我们可以在这两个波长的光T分别测叶绿素提取液的消光度并根裾其不同情况的比吸收系数来计算叶绿素a、b各自的含S。另外，由于叶绿素a、b在652nm波长光照下有相同比吸收系数34.5,故可测出总叶绿素含量。叶绿素荧光仪参数分析：接受了1个光子的激发态的叶绿素有三种途径來回到基态，分别为荧光、光化学反应和热。因此测量叶绿素荧光动力参数对以反映棺物光合作用的状态（光能的吸收、转运及分K等）。叶绿素荧光仪可分为连续

2、激发式与脉冲调制式，木次试验用的足脉冲调制式，冇便携的特点。已知梢物荧光多来自PSII灭线色索蛋白合体中的叶绿索a，荧光发射波长范围约在650-780nm，发射峰在685nm与735nm。当桢物经过暗适应后，所有的PSII都处于完全打开状态，即其不游PQ等都处于氧化状态，PSII系统可以接受电子。此吋经过激发光照射后所发射的荧光足固定荧光F。。之后川饱和脉冲技术，即川一个持续吋间很短的强光关闭所有光合作用电子门使PSII的光化学作用暂时无法进行，再测M荧光，可得敁大值Fm（此时光合作用能fi全部转化为災光和热）。Fv为可变災光，为Fm与F。之差，反

3、应了QA的还原情况。实验仪器及材料脉冲调制式叶绿素荧光仪，分光光度计，研钵，漏斗，分析天平。菠菜叶，80%丙酮，碳酸钙，石英砂，不同环境下的烟草。实验步骤1.叶绿素定量测定1.称取新鲜菠菜叶片5g剪碎置于研钵中，加入适M碳酸钙与石英砂和适M•丙酮，匀浆,继续加入适S内酮碾磨充分，用内酮过滤于带刻度试管内，定容至25ml，摇匀。2.以80%丙酮为参比液，分别在645nm、663nm与652nm波长光照射下测景吸光度。3.处理数据。2.叶绿素荧光仪参数分析1.选取一盆从温室移至室内条件下的烟草植株与一盆室内条件（逆境）处理的烟草植株，分别在相似位置夹上

4、叶八夹了，暗适应20min。2.用叶绿素荧光仪在Fv/Fm档测量叶片荧光参数。3.数据分析。实验结果1.原始数据记录1.叶绿素定量测定表1.稀释1倍后的提取液0D值测量波长（nm）645663652OD0.4081.0070.582表2.稀释2倍后提取液0D值测量波长（nm）645663652OD0.1900.4380.2512.叶绿索荧光仪参数分析表3.荧光参数第一组参数FoFmFv/mFv/o正常23912490.8084.225胁迫2789660.7122.474表4.荧光参数第二组（同组人测量）参数FoFmFv/mFv/o正常3161550

5、0.7963.905胁迫31711710.7292.6941.数据处理及分析1.叶绿素定量测定由于稀释一倍吋奋测暈数据超出景程，故改为稀释两倍。已知叶绿素a、b80%丙酮溶液最大吸收峰迕663nm下分别为82.04与9.27,645nm下分别为16.75与45.6,可列出关系式:D663=82.04Ca+9.27bDe4S=16.75Ca+45.6b代入稀释两倍P的数裾，解得Ca'=5.08mg/l,Cb'=2.31mg/l故原提取液闪Ca=20.32mg/l,Cb=9.24mg/l。叶绿素总量为CT=29.56mg/l。若川OD652求叶绿素总含

6、景：_D652*1000由稀释一倍的数据得源提取液叶绿素总浓度CT1=33.7mg/l由稀释两倍的数据得源提取液叶绿素总浓度CT2=29.1mg/l由CT、CT1和CT2算出的叶绿素含量分别为1.478mg/g、1.685mg/g、1.455mg/g。1.叶绿素荧光仪参数分析Fo：在第一组数椐中，FOlE常〉且差值为39.而第二组数据中「（，权与卩…隧相差不大，有Fo^—F0^=loF。为基础荧光，足在所奋PSII都处于打开状态吋，即都可以发生光反应吋，收到适3激发光后发出的荧光。是一•个与叶绿素浓度有关的基础量。因此可能与是否受短期胁迫关系不大，

7、而与叶什木身生长状态有关。Fm：受胁迫的Fm值明兄小于不受胁迫的Fm值。Fmira-FmlM=283,Fm2正^Fm2M=379。FFm为所有PSII关闭时所测荧光，即此情况卜PSII将本來要转化为传递电子的能M都作为荧光与热散发出。因此Fm可川來人致表示叶片接收的光能。Fv>Fv/m,Fv/0：Fv=Fm-F0,表示可变荧光，是在排除了同定荧光后所剩的光能，即可能用于光化学反应的最人能量。匕可以反映叶绿素的活忡。由数裾知胁迫条件下Fv明显减小，可知在胁迫状态屮光合作用系统受阻。Fv/m是PSII最大光化学量子产量，可反映PSII反应中心的敁大光能

8、转挽效率。分析数据知Fv/mn都稍稍大于Fv/m„，即正常椬株的PSII最大仙光能转换率稍大于受胁逍桢株。Fv/Q可表示P