大蒜多糖组分a总多糖含量的分光光度法测定

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1、大蒜多糖组分A总多糖含量的分光光度法测定余薇,查文良,梁惠敏,吴基良,刘彤云【摘要】  目的 对大蒜多糖组分A进行提取并测定其含量。方法采用0.5%草酸铵溶液提取、醇沉的方法分离纯化大蒜多糖组分A,以苯酚-硫酸显色法测定大蒜多糖组分A的含量。结果在2.0~15.0μg/ml内,浓度与吸光度呈良好线性关系。回归方程:A=0.0806C-0.0219(r=0.9934,n=10),平均回收率为96.14%,RSD%为0.06(n=5)。大蒜多糖组分A的平均糖含量为77.40%,RSD%为3.74(n=5)。结论方法简便,结果准确,为今后对大蒜多糖的药理作用以及其它组分

2、进一步研究奠定良好的基础。【关键词】大蒜多糖组分A;Sevage法;苯酚-硫酸法;多糖  Abstract:ObjectiveThepolysaccharidesAgarlicandthecontentined.MethodsPolysaccharidesAmoniumoxalateandethanolprecipitation,thecontentinedbyphenol-sulfuricacidunder485nm.ResultsFromtherangeof2.0-15.0μɡ/ml,theregarlicethodissimpleandaccurate.  

3、Key处无吸收,表明大蒜多糖组分A中无蛋白质成分,而在190nm处有多糖的特异性吸收峰。见图1。  2.2试剂的配制  2.2.1标准品溶液的制备  精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖10.0mg置100ml容量瓶中,加水溶解,稀释至刻度,摇匀即得浓度为100μg/ml的标准品溶液。  2.2.2供试品溶液的制备  精密称取55℃干燥至恒重的大蒜多糖组分A10.0mg置100ml容量瓶中,加水溶解,稀释至刻度,摇匀即得浓度为100μg/ml的多糖供试品液。  2.2.35%苯酚试剂的配制  取苯酚100g,加铝片0.2g和NaHCO30.1g,蒸馏。收集180~1

4、82℃馏分,精密称取精制苯酚5.0g溶解后转至100ml容量瓶中定容,摇匀,得5%苯酚试剂。  2.3检测波长的选择  精确量取80μg/ml的葡萄糖溶液1.0ml,样品溶液1.0ml置干燥试管中,分别加入5%苯酚溶液1.0ml摇匀,然后加入浓H2SO45.0ml摇匀,另以1.0ml水作同上操作,作为空白液,于室温中放置5min,沸水浴中恒温15min,取出,冰水浴冷却至室温,在波长200~800nm之间扫描。结果供试品与标准品溶液在485nm波长处均有最大吸收,而空白溶液在此波长处无干扰,故选用485nm为检测波长。见图2~3。  2.4标准曲线的绘制  精密量

5、取标准品溶液0.0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9,1.0ml分别置11只试管中,各加蒸馏水至1.0ml,再加1.0ml5%苯酚溶液,摇匀后再加入5.0ml浓H2SO4,摇匀,室温放置5min,沸水浴中恒温15min,取出,冰水浴冷却至室温,在485nm处,以蒸馏水管作为空白对照,测定各浓度标准液的吸光度,以糖浓度C为横坐标,吸光度A为纵坐标绘制标准曲线,计算得回归方程A=0.0806C-0.0219(r=0.9934,n=10),两者相关性较好。见图4。  2.5换算因素的测定  精确量取供试品溶液2.0ml,按测定标准曲

6、线同样的方法测其吸光度值。按下式计算换算因素f=2.0078。f=l),D为供试品溶液的稀释倍数。  2.6精密度实验  随机取“标准曲线绘制”项中其中一支葡萄糖试管液,置于光度计中,反复测量该标准液的吸光度5次,结果RSD=0.21%。见表1。表1精密度实验(略)  2.7稳定性实验  精密量取50μg/ml多糖样品1.0ml,按测定标准曲线同样的方法每隔20min测定样品溶液吸光度,观察100min内吸光度的变化情况,算得吸光度的RSD=0.13%,结果表明样品溶液在100min内显色稳定。见表2。  2.8重复性实验  精密称取同一批次大蒜多糖组分A10mg

7、各5份,分别置于5个100ml容量瓶中定容,精密量取100μg/ml多糖样品溶液5.0ml于10ml容量瓶中,稀释成50μg/ml的样品溶液,各取1.0ml于5支干燥试管中,按测定标准曲线同样的方法操作,在485.0nm处分别测定其吸光度,算得其RSD=3.74%。表2稳定性实验(略)  2.9多糖含量的计算  精密称取多糖10.0mg,用蒸馏水溶解后定容到100ml,精密量取100μg/ml多糖溶液5ml至10ml容量瓶中稀释至50μg/ml的样品溶液。取样品液1.0ml,按测定标准曲线同样的方法测其吸光度,算得平均糖含量为77.40%。见表3。表3多糖含量的计

8、算(略) 

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