高山冰缘植被高山离子芥cbf15基因、拟南芥att26j14.6基因性能研究

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1、高山冰缘植被高山离子芥CbF15基因、拟南芥AtT26J14.6基因性能研究第一章绪论高山离子芥是种典型的高山冰缘植物，常年生长在高海拔低气温环境下。它与模式生物拟南芥同属十字花科植物，具有很高的亲缘性。导师安黎哲教授实验室常年来一直以高山离子芥为实验材料，筛选并分离出了大量参与响应低温胁迫-的基因，并致力于这些基因的功能研究，试图揭示高山离子芥响应低温胁迫的分子机理。高山离子芥OFiJ基因便是本实验室通过抑制性消减杂交的方法，筛选出在-4°C下上调表达基因中的一种。本研究选择高山离子芥CD18-T。菌株

2、：大肠杆菌株DH5a、农杆菌GV3101菌株、大肠杆菌表达菌株。2.2高山离子芥CbFl5基因cDNA全长克隆取在-4°C培养箱中处理24h的新鲜高山离子芥愈伤组织，使用TRIZOL法提取其总RNA。因为之前本实验室岳修乐等人运用SSH方法筛选得到CARTTmracecDNAAmplificationKit试剂盒，参考SmartRACE说明书，制备5'RACE模板。利用primerpremier5.0软件，根据已测中间序列进行特异引物的设计，得到引物GSP2(表2.1)，该引物的退火温度大于GC含

3、量介于40%-60%之间，长度为28bp。分别以GSP2+SMARTII?aOligonucleotide进行PCR扩增。扩增产物进行回收，并将回收产物连PMD18-T载体。转化大肠杆菌DH5a感受态细胞。将菌落PCR阳性克隆送往测序，得到高山离子芥C6f75基因5'序列。将得到的高山离子芥a)F/5基因5，序列与之前的部分序列进行拼接，得到高山离子芥CbFl5基因cDNA全长。第三章高山离子芥CbF15基因功能.........31-423.1高山离子芥CbF15基因cDNA全长.........31-

4、373.2高山离子芥CbF15基因表达初步定位.........37-383.3胁迫处理下CbF15蛋白翻译水平的分析.........38-42第四章拟南芥AtT26J14.6基因功能研究结果.........42-534.1拟南芥AtT26J14.6蛋白纯化及抗体获得.........42-434.1.1AtT26J14.6蛋白原核表达.........424.1.2多克隆兔抗的获得.........42-434.2拟南芥AtT26J14.6基因表达初步定.........43-444.3拟南芥AtT26J1

5、4.6基因T-DNA插入突.........44-464.4拟南芥AtT26J14.6基因突变体.........46-474.5在ABA、NaCl处理下拟南芥.........47-514.6拟南芥AtT26J14.6基因.........51-53第五章讨论与展望.........53-575.1高山离子芥CbF15蛋白和拟南芥.........535.2高山离子芥CbF15基因是一种胁迫.........53-545.3拟南芥AtT26J14.6基因与子叶发育.........545.4拟南芥AtT26J1

6、4.6基因可能参.........54-555.5CbF15基因和AtT26J14.6基因比较分析.........555.6后期研究计划.........55-57结论Shibasaki等人2009年研究表明，在冷胁迫处理下，低温可以抑制根中自上而下的生长素运输，并且对生长素的作用，是与细胞内生长素输出载体运出的抑制物相关(Shibasaki等，2009)。KosovaK等人2012年对冬小麦Samanta以及春小麦Sandra中的激素和抗冻性关系进行了研究，以绿色叶片和未绿的地下部分（除根外）为实验材料，发现

7、激素的含量伴随着冷胁迫（4°C)应答而变化，而激素的含量也影响着抗冻性（以LT50含量体现）。在低温处理的初期（1天），ABA的含量快速增加，并且保护蛋白（TPS5功能研究（兰州大学硕士研究生学位论'文），甘肃省兰州市，兰州大学，2011年9杜玉梅，左正宏（2008)；基因功能研究方法的新进展，生命科学，2008年8月，第20卷，第4期，589-59210樊红，（2002)；克隆新基因cDNA全长的策略和方法，国外医学遗传学分册，2002年，第25卷，第1期，11-13(责任编辑：gufeng)