资源描述：
《气虚血瘀大鼠炎症免疫相关基因差异表达的研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、气虚血瘀大鼠炎症免疫相关基因差异表达的研究论文.freelolecularbiologicalbasisassociatedmatoryandimmuneresponseinQideficencyandbloodstasissyndrome.MethodsTlydividedintomodelgroupandcontrolgroup.RatGenome2302.0ArrayGeneChipinationofgeneexpressionprofilesinratseandnormalrats.Differentalex
2、pressiongenesassociatedmatoryandimmunemechanismodelgroup,theup-regulatedmatoryandimmuneresponse.ConclusionDifferentalexpressiongenesassociatedmatoryandimmuneresponserevealedthatthereeandabnormalinflammatoryandimmuneresponse.Keye；animalmodel；genechip；inflammatio
3、n；immuneresponse本实验利用全基因芯片技术,通过对气虚血瘀大鼠和正常大鼠基因表达谱的差异分析,首次揭示气虚血瘀证炎症免疫机理的分子生物学基础,.freela公司,RNeasyMicroKit为Qiagne公司产品,基因芯片扫描仪为Affymetrix公司产品。2实验方法2.1造模将12只大鼠随机分成气虚血瘀模型组和正常对照组。模型组采用饥饿、疲劳等综合因素造成大鼠气虚血瘀模型。第1周限制大鼠食入量(摄食正常1/3量),第2周开始强迫大鼠游泳(水温14～16℃),待疲劳时捞出水面,每日1次,连续3周1。对
4、照组每日正常饮食。2.2基因芯片实验2.2.1总RNA提取及纯化第4周末,大鼠麻醉后在无菌条件下腹主动脉抽血1mL,采用Trizol一步法抽提全血总RNA,操作参照说明书进行。抽提总RNA的质量及纯度采用1%琼脂糖电泳和紫外分光光度计检测分析。然后用RNeasyMicroKit试剂盒纯化总RNA,具体操作按说明书进行。纯化后的总RNA经紫外分光光度计检测,A260/A280吸收率为1.8～2.0时说明RNA质量较好,并根据A260值(A260＝1时RNA为40mg/L)计算RNA浓度。每组6只大鼠全血总RNA等比例混
5、合。2.2.2芯片实验用One-cyclecDNASynthesisKit(Affymetrix公司)将总RNA逆转录成双链cDNA,后经GeneChipIVTLabelingKit(Affymetrix公司)以cDNA为模板合成标记的cRNA经纯化及片段化处理(处理为35～200bp)后,取cRNA片段15g配制杂交液,与RatGenome2302.0ArrayGeneChip(28000个基因,Affymetrix公司)在杂交箱中杂交16h。取出芯片,去除杂交液,加入漂洗缓冲液直至芯片舱充满,对芯片进行洗脱和染色
6、。在芯片扫描仪上扫描芯片信息。2.2.3结果分析采用GCOS1.4软件处理数据,将芯片所有探针组的Signal从小到大排序,去掉最大的2%和最小的2%后,将剩下探针组的平均信号值调整到500。用管家基因进行数据的归一化处理。数据进一步处理用Excel进行。3结果3.1造模大鼠一般状态的变化模型组大鼠表现出倦怠少动,活动无力,过劳(游泳)后气短喘息,毛色枯槁、杂乱,大多数大鼠尾绀稍凉,体重明显下降。对照组大鼠活动灵活,毛色洁白光泽,未见尾绀稍凉,体重逐渐增加,无其他异常表现。3.2基因芯片结果分析3.2.1基因表达差异
7、散点图散点图显示,检测信号强的基因超出2倍线较少,而检测信号处于边缘值、检测信号很弱的基因因其检测信号值基础较低,故超出的基因较多,所以会造成较多的假阳性。因此在以后的分析中我们主要选择检测信号强的基因进行数据分析。3.2.2基因差异表达统计分析我们用以下2个条件为判断基因差异表达的标准2：①信号比值2.0为表达上调,0.5为表达下调。②在两个比较的信号值其中之一信号检出值必须为P。结果气虚血瘀模型组较正常组表达上调(倍数2.0)的基因有831个,其中已知功能的基因563个,268个未知功能或是EST标签,表达下调(
8、倍数0.5)的基因有782个,其中已知功能的基因544个,未知功能的基因或为EST标签238个。3.2.3与炎症免疫相关的差异表达基因在已知功能基因中,与炎症免疫反应相关的表达上调的基因49个,表达下调的基因17个,包括介导细胞因子的生成、免疫反应的调节、炎症反应、免疫反应、信号转导等生物功能(见表1、表2)。表1气虚血瘀大鼠炎症免疫相关表达上
