石蜡切片技术在蝗虫形态学中的应用

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1、石蜡切片技术在螳虫形态学中的应用李凌平（摘要）石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学科用以研宄，观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也己相当广泛地用于其他许多学科领域的研宄中.教学中，光镜下观察切片标木多数是石蜡切片法制备的。〔关键词）石蜡切片生物实验教学应用1石蜡切片技术的流程取材-固定-冲洗-脱水-透明-浸蜡-埋-切片-染色-封蜡1.1取材：从蝗虫中取出要切片的部分，材料要求新鲜，分别运用横切法或纵切法切取要研究的部分，材料大小一般在3乘3乘2立方毫。1.2固定：将取出的材料立即投入固定的液中，目的

2、是防止组织腐败和自溶，是它保持原有的结构。在木试验中所用的固定液是Bouin氏液，固定的时间须8小时左右。1.3冲洗：固定的材料一般要经过冲洗，目的在于洗去标木中过剩的固定液，以免沉渍于材料中影响制片和染色。一般用70%的酒精冲洗数次直至除去黄色为止。1.4脱水：为使组织能完全包埋于石蜡中切成薄片，组织经固定水洗后，必须先让它完全脱去水分。1.5透明：将脱水后的组织块移入100%酒精与二甲苯混合液（体积1:1）10-20分钟后，换入纯的二甲苯液30-40分钟，直到组织透明为止。观察组织块是否透明，可对着光观察，组织呈糖饴的颜色或透明状

3、即可。1.6浸蜡：将己透明的组织块浸入透明剂与石蜡（体积比1:1）的混合液中20-30分钟，然后移入己溶的纯石蜡I,纯石蜡II各一小时，逐步除去透明剂，使石蜡浸入组织块的各个部分，便于以后进行切片。在浸蜡过程需在恒定的60摄氏度温箱中进行。1.7包埋：包埋方法可以用染色缸盖包埋，也可以折一个小纸盒包埋，大小随组织块的体积而定，也可以用金属铸成的无底包埋框，下面放一白瓷砖包埋。包埋前准备一盆冷水，一把镊子，一把小烫蜡铲，一个洒精灯，一支玻璃管;包埋吋在纸盒或其他容器上涂上一层薄甘油，然后倒入融化的石蜡，用镊子在酒精灯上稍加热，轻轻将组织

4、块和标签夹入纸盒或包埋框内，将要切的面朝下摆正位置待蜡完全凝固后，剥去纸盒或包埋框，保存蜡块待进一步切片。1.8切片：切片前需要修整好蜡块，并将它固定在木块上，把每一小块蜡修成长方体。1.9染色：将切片放入二甲苯内5-10分钟，1.10封蜡：切片上以中性树胶，然后覆盖上盖玻璃片，标本即可长期保。2试剂的配制2.1酒精的配制。取95%酒精75毫升，加A20毫升水得到95毫升，75%的酒精溶液,取95%酒精80毫升，加入10毫升水得到95毫升，80%的洒精溶液，由此可知，定容到95毫升，用95%洒精作原料，取多少95%洒精,便可得到百分之

5、多少的酒精溶液。此法可配制酒精浓度梯度。2.2H.E染色剂的配制。取伊红1克溶于5毫升蒸馏水中，待全部溶解后，将冰醋酸逐滴加入其溶液中，边搅拌，直到沉淀形成为止，再加2毫升蒸馏水，继续滴加冰醋酸，使沉淀不再增加为止。2.3Bouin’s固定液的配制。苦味酸水溶液75毫升，甲醛水溶液25毫升，冰醋酸5毫升。3试验中应当注意的问题3.1脱水。脱水过程中出现的问题主要是脱水不浄和过度硬化，脱水不浄吋二甲苯不能渗入，蜡液不能渗入组织，可导致切片闲难，切出的片子在染色时易脱片。而组织蜡块与空气接触后也会因水分蒸发而凹陷，故脱水吋一定

6、要保证脱水液浓度达标，经常更换新液，遇脂肪组织或疏松的纤维组织宜加长脱水吋间。3.2透明。二甲苯是最常见的透明剂，但其收缩性强，极易是组织变脆，故在这一过程中要严加控制，一般30分钟就可以达到透明的程度，但温度较低吋可适当延长吋间或置于温箱中加热，另外在透明过程中还要注意更换二甲苯，有时其至更换两三次以上，每次10分钟左右，若二甲苯为旧液体，应选择多的更换次数。3.3浸蜡和包埋。浸蜡和包埋要一次完成，要尽量在恒温下操作，防止中间出现温度差。蜡的温度要适宜，不能过高使组织烫坏或使碎小组织变脆和变硬，也不能温度过低使组织与石蜡脱离，蜡块中

7、不能出现气泡，裂隙和斑点。对于碎小组织要尽可能使其处于同一平面，否则会造成切片不全与漏切，此时要尽可能使碎小组织下沉，并防止其重叠。3.4切片。手工切片时，用力要均匀一致，不宜过重过猛，容易造成切片厚薄不均，甚至毁坏蜡块。为保持蜡块硬度，可把蜡块放于冰柜中，切吋取出，组织蜡块四周在切片前应修齐，大小适当，切片机要放稳，不能震动,切片刀要放置好，倾斜角要大小适宜，一般以20—30为宜。3.5染色。染色过程中出现的总是较多，除了要防止染色效果不佳外，还要注意不能脱水。为此首先要注意染色液的配制浓度要准确，pH值要适当，且不能有沉淀。染色前

8、切片脱蜡要彻底。染色吋间要跟据染液的新旧适当调整，必要吋在染色过程中用显微镜观察，染色过程中避免阳光照射，水冲洗不宜太猛。3.6封固。切片封固不良，易出现色素颗粒，气泡，云雾状物等，其原因大致为：封固吋二甲苯己挥发完毕，