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时间:2018-11-16
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1、玻璃体内注射谷氨酸导致大鼠视网膜Müller细胞内ERK1/2磷酸化水平增高论文周润海严宏段小莉王百忍【关键词】谷氨酸IntravitrealglutamateinjectioninducesanincreasedphosphorylationofERK1/2inretinalMüllercellsofrats【Abstract】AIM:ToanalyzethechangesofphosphoERK1/2inretinalMüllercellsbyusinganintravitrealglutama
2、teinsultandtoexploretheneuroprotectionroleofactivated(phosphorylated)ERK1/2againstglutamatecytotoxicityinretina.METHODS:A2μLofsalineorglutamate(375nmol)unilateralvitreousbodyfor3dor7din18SDrats.Theratslydividedinto3groups:Controlgroup(salineinjections)
3、,glutamateinjections3dgroupandglutamateinjections7dgroup.ThechangesoftheactivatedERK1/2munohistochemicalstainingandputerpictureanalyticsystem.RESULTS:After7dintravitrealglutamateinsult,theactivatedphenotypesofretinalcellsexhibitedahypertropicmorphology
4、andincreasedimmunostainingforERK1/2.Bythestainingpatterninshapeandlocalization,thepositivecellsedtobeMüllercells.Thegraylevelofglutamateinjections7dgroupongthe3groups.Thedifferencebetateinjections7dgroupandothertateinsultsuggeststhatphosphoERK1/2playsa
5、nimportantneuroprotectiveroleatecytotoxity.【Keyicacid;retinalMüllercells;ERK1/2【摘要】目的:观察大鼠玻璃体内注射谷氨酸后视网膜Müller细胞内ERK1/2分子的磷酸化水平,为探讨ERK1/2通路的激活在谷氨酸毒性损伤视网膜时的保护作用提供形态学证据.方法:SD大鼠18只,随机分为生理盐水对照组、谷氨酸注射后3d组和7d组,每组6只.随机选取大鼠的一只眼进行玻璃体内注射,实验组注射谷氨酸(375nmol)2μL,对照组注
6、射等量生理盐水,注射后3或7d后,取出眼球作冰冻切片.freelg/kg行ip麻醉,用5g/L丁卡因点眼2次行眼表麻醉,用10μL的微量注射器(上海医用激光仪器厂)经颞侧巩膜刺入玻璃体内,处理组玻璃体内注射375nmol的谷氨酸(美国Sigma公司,粉剂用生理盐水溶解)2μL[3],对照组眼内注射生理盐水2μL.13标本固定和切片每组模型建好后,动物成活3或7d,然后用10g/L戊巴比妥钠(80mg/kg)行ip麻醉,麻醉后开胸,经心脏用100mL生理盐水和40g/L多聚甲醛(pH74)固定液500
7、mL灌注,取出眼球,用200g/L蔗糖溶液后固定.将眼球用TissuTek包埋,在-20℃的冰冻切片机内做眼球矢状冰冻切片,片厚16μm.切片在-20℃保藏.14免疫组织化学染色采用免疫组化ABC染色法.10mmol/LPBS漂洗5min×3次;30g/LH2O2封闭30min;10g/L牛血清白蛋白和30mL/L正常羊血清在室温分别孵育切片20min;切片浸入3mL/LTriton×100大约5min;兔抗pERK1/2抗体(1∶1000,Sigma公司)室温下孵育切片24h;生物素化的羊抗兔Ig
8、G(1∶500,Vector公司)室温下孵育4h;生物素辣根过氧化物酶复合物(ABC,1∶500Vector公司)室温孵育2h;硫酸镍铵加强DAB蓝色反应呈色,当阳性产物呈深蓝色而背底几乎无色时终止反应,.freelement570图像分析仪,放大倍数为40×,用Quic图像分析软件测得视网膜免疫反应强度(平均灰度,染色越深灰度值越小,最黑为0),每个切片随机选择3个视野,测定阳性细胞的灰度值,以平均值作为判断该大鼠视网膜上的pERK表达水平的标准.统计学处理3组均数
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