鞘内注射氟代柠檬酸对骨癌痛小鼠机械痛敏和热痛敏的影响

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1、鞘内注射氟代柠檬酸对骨癌痛小鼠机械痛敏和热痛敏的影响：申文马正良黄小冬曾因明【摘要】目的观察脊髓水平氟代柠檬酸(fluorocitrate)对骨癌痛小鼠机械痛敏和热痛敏的影响，探讨脊髓星形胶质细胞在伤害性信息传递中的作用。方法C3H/HeJ小鼠48只，随机分为6组(n=8):假手术组(Sham组)，骨癌组，骨癌+生理盐水组，骨癌+氟代柠檬酸0.25nmol/5μl、0.50nmol/5μl、0.75nmol/5μl组。骨癌组和Sham组测定术前及术后7、12、17、21天小鼠机械缩腿阈值(ME2410A，中国医学科学院生物工程研究所生产。1.2细胞培

2、养细胞培养基采用NCTC135培养基，其中含有10%的马血清，ATCC所推荐，每周传代1次，按1∶4~6扩增。1.3骨癌痛模型的建立参照Schg/kg,i.p)，行右膝关节切开术，暴露股骨关节面，然后用4号注射针头钻穿股骨，再换用20μl微量注射器将含有2×105个肿瘤细胞的α-MEM培养基(内含1%牛血清白蛋白)20μl注入股骨远端，假手术组只注入20μlα-MEM培养基(内含1%牛血清白蛋白)。注射完毕用牙科玻璃离子封住针孔，再用无菌生理盐水冲洗创面，创口缝合。1.4小鼠鞘内注射(intrathecalinjection,ith)按压小鼠腰骶两侧

3、固定,自L5–6棘突间进针，以鼠尾突然出现侧向运动为注射成功标志。注射用10μl微量进样器进行,注射容积为5μl，注射时间10s，留针20s。1.5动物分组及给药C3H/HeJ小鼠48只，随机分为6组(n=8):假手术组(Sham)；骨癌+生理盐水组：模型成功建立后17天鞘内注射生理盐水5μl；骨癌+氟代柠檬酸0.25nmol/5μl、0.5nmol/5μl、0.75nmol/5μl组：模型成功建立后第17天分别鞘内注射氟代柠檬酸0.25nmol/5μl、0.5nmol/5μl、0.75nmol/5μl。所有药物均用生理盐水稀释到5μl。1.6行为学

4、测定Mol/μl组在给药后30min时达到最大效应(P＜0.01)，并且持续到给药后2h。给药后2h各组均恢复到给药前水平(见表2、3)。各鞘内给药组对大鼠运动功能均无影响。表2鞘内注射氟代柠檬酸对骨癌痛小鼠机械痛敏阈值的影响表3鞘内注射氟代柠檬酸对骨癌痛小鼠热痛敏阈值的影响3讨论1999年，Schin之内；其二，穿刺点用眼科玻璃离子封闭，此措施更易于封住针眼而不致肿瘤细胞从针孔外溢，导致肿瘤在骨外生长，造成模型失败，同时也要注意无菌操作。以往实验证明在慢性给予吗啡引起的耐受中星形胶质细胞的代谢产物胶质纤维酸性蛋白（glialfibrillaryac

5、idicprotein,GFAP）显著升高，而给予氟代柠檬酸则可以减少吗啡的耐受作用，增强其镇痛作用［6］，即抗胶质细胞与吗啡镇痛有协同作用，间接证明了胶质细胞可能参与疼痛的维持和发展。此外在神经损伤以及炎性痛模型的动物实验中,鞘内注射1nmol的氟代柠檬酸能够明显的减轻由于神经损伤和炎症引起的痛觉过敏和异常性疼痛［7-8］，提示星形胶质细胞与疼痛信息的传递关系密切。在本实验中我们建立稳定的骨癌痛模型后，经鞘内注射星形胶质细胞代谢抑制剂氟代柠檬酸，从行为学的角度观察到其对骨癌痛小鼠具有镇痛作用。在实验中采用鞘内注射的方式，可使药物直接作用于脊髓的不同

6、靶位，避免或最大限度地排除经静脉或腹腔给药对机体中枢神经系统以外的影响，使观察结果更为可靠；3个剂量组的结果均显示不影响小鼠的运动功能。对于大鼠1nmol剂量的氟代柠檬酸能够完全、可逆的阻断星形胶质细胞的新陈代谢，而并不影响神经元的代谢作用［9］。我们在预实验中观察到,1nmol以上氟代柠檬酸鞘内注入可使小鼠的活动明显增多，而本实验所用药物剂量对小鼠运动功能无影响。实验中观察到3个剂量组均能够明显减轻骨癌痛小鼠形成的机械痛敏和热痛敏，且随着剂量的增加而增强，持续时间也延长，提示星形胶质细胞参与了骨癌痛小鼠伤害性信息的传递。其可能机制为：星形胶质细胞是

7、兴奋性神经递质代谢的重要场所，骨癌痛中星形胶质细胞激活后导致神经末梢谷氨酸堆积以至引起神经系统的过度兴奋；此外激活的星形胶质细胞可以分泌一系列的细胞因子和生长因子，改变神经元周围的神经化学环境，导致中枢敏感化，而氟代柠檬酸能够能够通过抑制顺乌头酸酶而选择性的抑制星形胶质细胞的代谢活性，进而抑制中枢敏化的形成而产生抗伤害作用。具体机制，有待于进一步实验研究证明。【